Immunological accommodation, Treg/Breg and co-stimulatory signal in ABO-incompatible kidney transplantation

ABO 不相容肾移植中的免疫调节、Treg/Breg 和共刺激信号

• 批准号: 20K09573
• 负责人: 齋藤 和英
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09573/
• 关键词: ABO血液型不適合腎移植; 免疫学的順応; 免疫寛容; 共刺激分子; 制御性B細胞; 制御性T細胞

2020年度はIn vitroの抗血液型抗体産生定量モデルにおけるリンパ球サブセット解析予備実験を行なった。健常人対照末梢血からPBMCを分離し我々が設定した条件（2.5%ヒトAB血清, rIL12，rIL15添加AIMV培地）で培養しフローサイトメトリー（FCM）解析条件設定を行った。各々CD3,CD4,CD8をT細胞、CD19,CD20をB細胞、CD38,CD138を形質細胞マーカーとして解析するための染色・FCM実施の至適条件を検討した。更にPD-1,PD2,PD-L1,PD-L2,CTLA4を共刺激因子マーカー、CD25,FoxP3をTreg, IL-10,CD5,CD1dhi,TIM1,IL-10をBregマーカーとしFCM実施のしてき条件を検討した。T,B細胞条件設定は順調に進んだが、共刺激因子、Treg,Breg染色とFCM条件設定には既存論文報告条件を参考にしたがヒト末梢血では対象細胞数が少なく再現性を持って条件設定することがかなり困難であることがわかった。上記と並行しABO血液型不適合腎移植患者からリンパ球供与を受けるための研究計画書、患者説明同意書を作成し本学倫理委員会の審査承認を受けた。2021年度は患者から同意を得て末梢血を採取し上記の健常人検体で設定した条件下での細胞解析を開始したが、免疫抑制療法を受けている患者の抹消血リンパ球数は極端に少なく、十分な解析が行えない患者も多数おり、解析に難渋した。さらに2021、2022年度には当施設所有のフローサイトメーターが複数回故障し、経費と時間（コロナ禍の影響もあり修繕業者の依頼にも相当な時間が経過）をかけて修繕したにも関わらず、再び故障を繰り返し、研究遂行が何度も中断せざるを得なかった。修繕費用と時間の関係で研究期限内で結果を出すことが困難な状況となり研究費執行の期限を1年間延期申請して現在に至った。

在2020年，我们在体外抗细胞型抗体生产定量模型中进行了淋巴细胞子集分析的初步实验。从健康人类对照的外周血中分离出PBMC，在我们设定的条件下（2.5％的人类AB血清，RIL12和含RIL15的AIMV培养基）和流式细胞仪（FCM）分析条件。我们分别研究了染色和FCM的最佳条件，将CD3，CD4和CD8分别为T细胞，CD19和CD20作为B细胞，CD38和CD138分别为等离子细胞标记。此外，通过使用PD-1，PD2，PD-L1，PD-L2和CTLA4作为costimulatoratoration因子标记物以及CD25和FOXP3作为Treg，IL-10，CD5，CD5，CD1DHI，TIM1，TIM1和IL-10作为Breg Markers进行研究，研究了条件。尽管T和B细胞的设置正在顺利进行，但我们使用了现有的纸质报告条件来确定共刺激因素，Treg和Breg染色和FCM条件，但发现人外围血液中靶细胞的数量很小，很难设置有可重复性的条件。与上述同时，准备了研究计划和患者解释同意书，以从ABO血型患者接受不兼容的肾脏移植的患者接收淋巴细胞，并得到了大学伦理委员会的审查和批准。在2021年，在患者同意下收集外周血，并在上述健康的人类标本中设定的疾病开始，但是接受免疫抑制治疗的患者的外周血液淋巴细胞数量极低，许多患者无法进行足够的分析，使分析变得困难。此外，在2021年和2022年，我们的设施拥有的流式细胞仪多次破裂，尽管花费了成本和时间来维修产品（由于COVID-19-19的影响，这是Covid-19的影响，自维修公司自维修公司要求以来的大量时间），但该过程反复崩溃了，该过程被拒绝多次暂停。由于维修和时间的成本，很难在研究截止日期内获得结果，而且我已经申请了一年的截止日期，以执行今天的研究资金。

项目成果

Hyporesponsiveness against donor's ABO antigens of renal grafts after ABO-incompatible kidney transplantation

• DOI: 10.1007/s10157-022-02280-3
• 发表时间: 2022-10-08
• 期刊: CLINICAL AND EXPERIMENTAL NEPHROLOGY
• 影响因子: 2.3
• 作者: Tasaki，Masayuki;Tateno，Hiroaki;Tomita，Yoshihiko
• 通讯作者: Tomita，Yoshihiko