口腔癌におけるangiogeninレセプターplexin-B2の発現と機能解析

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(目的)Angiogenin(ANG)は、リボヌクレアーゼ活性を有する唯一の血管新生蛋白として発見されたが、内皮細胞のみならず癌細胞や神経細胞で細胞増殖、生存、 再生能力などの様々な生物活性を有する。2017年に、ANGレセプターがplexin-B2(PLXNB2)であることが報告されて以来、癌や神経変性疾患におけるPLXNB2を介したANGの生物活性機序が注目されている。本研究では、口腔癌におけるPLXNB2の発現とANGをリガンドとするPLXNB2の機能解析を行うことにより、ANG-PLXNB2経路を標的とした新規口腔癌治療の可能性を明らかにする。(実施計画)1. PLXNB2の発現が強い培養口腔癌細胞HSC-3を選択し、以下の実験を行う。2. PLXNB2 shRNAプラスミド DNA (Sigma 社)を使用し、LipofectamineTM 3000 Transfection Reagentを用いて遺伝子導入する。6well dishに70%コンフルエントの細胞を用意する。Mediumは6h前からDMEM，FBS(-)とする。PLXN:SIGMA MISSION shRNA Plasmid DNA。Control:SIGMA MISSION pLKO.1-puro Non-Mammalian shRNA Control Plasmid DNA。2日培養後、puromycinにてセレクションを行う。3. Stable shRNA transfectantを作製し、wild populationとして培養後、クローニングする。(成果) 再度、培養口腔癌細胞HSC-3に対して、PLXNB2 shRNAプラスミド DNA を遺伝子導入した。そして、stable shRNA transfectantを作製した。細胞を回収後、ウエスタンブロット法でPLXNB2の発現を調べたが、やはり有意な低下は認められなかった。