口腔癌におけるangiogeninレセプターplexin-B2の発現と機能解析

血管生成素受体丛蛋白-B2在口腔癌中的表达及功能分析

• 批准号: 20K10093
• 负责人: 岸本 晃治
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10093/
• 关键词: angiogenin; plexin-B2; 口腔癌

(目的)Angiogenin(ANG)は、リボヌクレアーゼ活性を有する唯一の血管新生蛋白として発見されたが、内皮細胞のみならず癌細胞や神経細胞で細胞増殖、生存、 再生能力などの様々な生物活性を有する。2017年に、ANGレセプターがplexin-B2(PLXNB2)であることが報告されて以来、癌や神経変性疾患におけるPLXNB2を介したANGの生物活性機序が注目されている。本研究では、口腔癌におけるPLXNB2の発現とANGをリガンドとするPLXNB2の機能解析を行うことにより、ANG-PLXNB2経路を標的とした新規口腔癌治療の可能性を明らかにする。(実施計画)1. PLXNB2の発現が強い培養口腔癌細胞HSC-3を選択し、以下の実験を行う。2. PLXNB2 shRNAプラスミド DNA (Sigma 社)を使用し、LipofectamineTM 3000 Transfection Reagentを用いて遺伝子導入する。6well dishに70%コンフルエントの細胞を用意する。Mediumは6h前からDMEM，FBS(-)とする。PLXN:SIGMA MISSION shRNA Plasmid DNA。Control:SIGMA MISSION pLKO.1-puro Non-Mammalian shRNA Control Plasmid DNA。2日培養後、puromycinにてセレクションを行う。3. Stable shRNA transfectantを作製し、wild populationとして培養後、クローニングする。(成果) 再度、培養口腔癌細胞HSC-3に対して、PLXNB2 shRNAプラスミド DNA を遺伝子導入した。そして、stable shRNA transfectantを作製した。細胞を回収後、ウエスタンブロット法でPLXNB2の発現を調べたが、やはり有意な低下は認められなかった。

(Purpose) Angiogenin (ANG) is the only blood vessel that has active activity. Neonatal protein として発见されたが, endothelial cells のみならず cancer cells や神経cells でcell proliferation, survival, Regenerative ability and biological activity. 2017に、ANGレセプターがplexin-B2(PLXNB2)であることがreportされてSince then, cancer and other diseases have attracted much attention. In this study, functional analysis of oral cancer PLXNB2 and oral cancer PLXNB2を行うことにより, ANG-PLXNB2経路を级としたNew regulations on the possibility of oral cancer treatment を明らかにする. (Realization Plan) 1. PLXNB2 has been shown to be strong enough to culture oral cancer cells HSC-3 and selected as follows. 2. PLXNB2 shRNA RNA DNA (Sigma) was used, and LipofectamineTM 3000 Transfection Reagent was introduced using a sterile tube. 6well dishに70%コンフルエントのcellをpurposeする. Mediumは6h agoからDMEM, FBS(-)とする. PLXN: SIGMA MISSION shRNA Plasmid DNA. Control:SIGMA MISSION pLKO.1-puro Non-Mammalian shRNA Control Plasmid DNA. After 2 days of culture, puromycin was used. 3. Stable shRNA transfectant is produced and wild population is cultured. (Results) Oral cancer cells HSC-3 and PLXNB2 shRNA were cultured again and DNA was introduced into them.そして、stable shRNA transfectantをproduced by した. After the cells were recovered, the PLXNB2 method was used to detect and reduce the amount of cells.