老化Ｔ細胞の機能解析およびその正常化方法の探索

免疫系の中心を担うＴ細胞は、加齢や疾患に伴って老化（senescence）あるいは疲弊（exhaustion）といった機能不全状態に陥ることが知られている。本研究は、Ｔ細胞の機能不全が誘導されるエピジェネティックなメカニズムの解明を目指すものである。昨年度、シングルセルRNA-seqによって機能不全状態のＣＤ４陽性Ｔ細胞集団を同定し、この細胞集団を規定する細胞表面分子のリストアップを行った。リストアップされた細胞表面分子をもとに、フローサイトメトリーでこの細胞集団を特定し、解析を進めることを試みたが、濾胞ヘルパーＴ細胞との区別ができなかったことで解析が難航した。他方、並列して進めていたin vitroにおける老化Ｔ細胞の誘導系についても、既報の論文で報告されているような明確なフェノタイプは得られなかった。そこで、実験系や解析対象が良く確立されている、がんにおけるＣＤ８陽性T細胞の疲弊にフォーカスを移し、疲弊に関わる新規遺伝子を同定する解析を始めた。出版済みの5つのRNA-seqデータを解析し、疲弊によって発現が上昇あるいは低下する遺伝子をリストアップした。次に、リストアップされた遺伝子をノックダウン（疲弊で発現が上昇する遺伝子）あるいは過剰発現（疲弊で発現が低下する遺伝子）させた際に、疲弊化がブロックされるかをin vivoスクリーニングにより解析した。スクリーニングには、B16-OVA担がんマウスにOT-I CD8陽性T細胞を移入することによって疲弊を誘導するモデルを用い、OT-I CD8陽性T細胞を移入する前に、in vitroにおいて候補遺伝子の過剰発現あるいはノックダウンを行った。２周のスクリーニングを経て、疲弊により発現が低下し、過剰発現によって疲弊がブロックされる遺伝子が１つヒットした。

免疫系の中心を担うＴ細胞は、加齢や疾患に伴って老化（senescence）あるいは疲弊（exhaustion）といった機能不全状態に陥ることが知られている。本研究は、Ｔ細胞の機能不全が誘導されるエピジェネティックなメカニズムの解明を目指すものである。昨年度、シングルセルRNA-seqによって機能不全状態のＣＤ４陽性Ｔ細胞集団を同定し、この細胞集団を規定する細胞表面分子のリストアップを行った。リストアップされた細胞表面分子をもとに、フローサイトメトリーでこの細胞集団を特定し、解析を進めることを試みたが、濾胞ヘルパーＴ細胞との区別ができなかったことで解析が難航した。他方、並列して進めていたin vitroにおける老化Ｔ細胞の誘導系についても、既報の論文で報告されているような明確なフェノタイプは得られなかった。そこで、実験系や解析対象が良く確立されている、がんにおけるＣＤ８陽性T細胞の疲弊にフォーカスを移し、疲弊に関わる新規遺伝子を同定する解析を始めた。出版済みの5つのRNA-seqデータを解析し、疲弊によって発現が上昇あるいは低下する遺伝子をリストアップした。次に、リストアップされた遺伝子をノックダウン（疲弊で発現が上昇する遺伝子）あるいは過剰発現（疲弊で発現が低下する遺伝子）させた際に、疲弊化がブロックされるかをin vivoスクリーニングにより解析した。スクリーニングには、B16-OVA担がんマウスにOT-I CD8陽性T細胞を移入することによって疲弊を誘導するモデルを用い、OT-I CD8陽性T細胞を移入する前に、in vitroにおいて候補遺伝子の過剰発現あるいはノックダウンを行った。２周のスクリーニングを経て、疲弊により発現が低下し、過剰発現によって疲弊がブロックされる遺伝子が１つヒットした。