保護的末梢血単核球を用いた脳梗塞治療法の機序の解明

阐明保护性外周血单核细胞治疗脑梗死的机制

• 批准号: 20K16485
• 负责人: 畠山 公大
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16485/
• 关键词: 脳虚血; 機能再生; 低酸素低糖刺激; 末梢血単核球; 脳梗塞; 再生医学; 細胞療法; 再生医療

申請者らはこれまで，脳梗塞に対する簡便・安全な細胞療法として，低酸素低糖(oxygen-glucose deprivation: OGD)刺激をした，末梢血単核球(peripheral blood mononuclear cells: PBMC)に着目して研究を行ってきた. 申請者は，これまで(1)PBMCにOGD刺激を加えることにより，PBMCが保護的極性に変化し，血管内 皮増殖因子(VEGF)などの組織保護因子を分泌すること，(2)OGD 刺激したPBMC(OGD-PBMC)を脳梗塞7日後のラットに投与すると，投与3日目の時点でPBMCが脳内に移行していること，(3)OGD-PBMC投与21日目のラットの脳内でVEGFの発現が亢進していること、(4)OGD-PBMC投与21日後のラットんお脳内で血管新生・軸索進展 が亢進していること，(5)OGD-PBMC投与ラットで脳梗塞後遺症が 改善することを示した.その一方で，OGD-PBMC投与21日後にラットの脳内で発現が亢進していたVEGFが，どのような細胞種に由来するものか分かっていない.また，脳虚血後の組織修復の詳細な機序も不明であった．そこで2021年度，OGD-PBMC投与モデルにおいて，VEGFが発現している細胞種を特定するために，ミクログリア，血管内皮等の各種細胞マーカーと，VEGFの蛍光二重染色を行った. その結果，各種細胞マーカーとVEGFの共局在が確認され，OGD-PBMC投与でミクログリアでのVEGF発現が有意に亢進していることがわかった.（当該データを含め，現在論文投稿中）2022年度においては，ヒトOGD-PBMC投与3日後のラットにおいて，ピモニダゾールとSTEM121（ヒト細胞質特異抗体）との二重染色を行い，低酸素領域に投与細胞が集簇している像を確認した．この結果から，脳内の低酸素環境が細胞療法の機序の一部をになっている可能性が示唆された．

The patients who applied for the disease were infected, the patients were safe, the low acid and low sugar (oxygen-glucose deprivation: OGD) stimulated the thrombocytopenia, and the peripheral blood nuclear globule (peripheral blood mononuclear cells: PBMC) was targeted at the study. Applicants received (1) PBMC OGD stimulation, PBMC protection, vascular endothelial growth factor (VEGF), tissue protective factor secretion, (2) OGD stimulation of PBMC (OGD-PBMC), 7 days after infarction, and 3 days of target time for PBMC migration. (3) OGD-PBMC showed significant increase in VEGF after 21 days, (4) OGD-PBMC and progression of angiogenesis after 21 days, and (5) OGD-PBMC showed improvement in post-infarction symptoms. On the other hand, the OGD-PBMC will show signs of hyperactivity after 21 days. There is an increase in the number of VEGF cells. In the year 2021, OGD-PBMC was used to detect DNA damage. In 2021, VEGF double staining was used to detect cell-specific genes, such as vascular endothelial cells, VEGF double staining, and so on. According to the results, all kinds of VEGF are confirming that OGD-PBMC and OGD-PBMC are now interested in increasing the impact of health care. (now in the submission of the article) 2022 election, please send OGD-PBMC after 3 days. The double staining of STEM121 (cell specific antibody) double staining was carried out. In the field of low acidity, the cluster of cellular antibodies was used to confirm the effect. The results show that the mechanism of the low-acid environmental method is an indicator of the possibility of double staining.

项目成果

脳梗塞に対する低酸素低糖刺激末梢血単核球投与による脳内変化

脑梗塞缺氧、低血糖刺激外周血单核细胞给药引起的脑部变化

• 发表时间: 2022
• 作者: Cossu Davide;Yokoyama Kazumasa;Sato Shigeto;Noda Sachiko;Sakanishi Tamami;Sechi Leonardo Antonio;Hattori Nobutaka;金山武史，畠山公大，大津裕，秋山 夏葵，二宮格，小野寺理，下畑享良 ，金澤雅人
• 通讯作者: 金山武史，畠山公大，大津裕，秋山 夏葵，二宮格，小野寺理，下畑享良 ，金澤雅人