The novel strategy for treating atherosclerosis by regulating endothelial microRNA

本研究は，動脈硬化モデルマウスにおいてmiR-335を負に制御することで動脈硬化を抑止することを目的とする．これを明らかにするため，今年度は、昨年度行ったものとは異なる動脈硬化モデルとして、4週間の高脂肪食に加え浸透圧ポンプを用いたアンギオテンシンⅡ皮下持続投与を行い動脈硬化を誘発し、昨年度と同様に評価した．また，血管内皮細胞を用いて，miR-335とターゲット遺伝子CHFRの直接的結合について解析した．申請者は，研究計画に則り，ApoE-KOおよびApoE/miR-335DKOマウスに対し，4週間の高脂肪食に加え，浸透圧ポンプを用いたアンギオテンシンⅡ皮下持続投与を行い，動脈硬化を誘発した．介入終了後，大動脈を単離しEn face Oil red O染色により，全大動脈での動脈硬化領域を定量化し比較したところ，ApoE/miR-335DKOマウス群において有意に動脈硬化が抑止されていることを発見した．また大動脈起始部および大動脈弁の組織学的評価をH＆E染色にて行い，ApoE/miR-335DKOマウス群において有意に動脈硬化が抑止されていることを確認した．加えて，動脈硬化巣の免疫蛍光染色により，平滑筋細胞およびマクロファージを染色し，動脈硬化巣の性状・構成細胞を比較した．加えて申請者は，昨年度に同定したmiR-335のターゲット遺伝子CHFRについて，3’UTRレポーターアッセイを行い，miR-335との直接的結合を証明した．これらにより，血管内皮細胞においてmiR-335によるNFκBの活性化機序を明らかにした．

本研究は，動脈硬化モデルマウスにおいてmiR-335を負に制御することで動脈硬化を抑止することを目的とする．これを明らかにするため，今年度は、昨年度行ったものとは異なる動脈硬化モデルとして、4週間の高脂肪食に加え浸透圧ポンプを用いたアンギオテンシンⅡ皮下持続投与を行い動脈硬化を誘発し、昨年度と同様に評価した．また，血管内皮細胞を用いて，miR-335とターゲット遺伝子CHFRの直接的結合について解析した．申請者は，研究計画に則り，ApoE-KOおよびApoE/miR-335DKOマウスに対し，4週間の高脂肪食に加え，浸透圧ポンプを用いたアンギオテンシンⅡ皮下持続投与を行い，動脈硬化を誘発した．介入終了後，大動脈を単離しEn face Oil red O染色により，全大動脈での動脈硬化領域を定量化し比較したところ，ApoE/miR-335DKOマウス群において有意に動脈硬化が抑止されていることを発見した．また大動脈起始部および大動脈弁の組織学的評価をH＆E染色にて行い，ApoE/miR-335DKOマウス群において有意に動脈硬化が抑止されていることを確認した．加えて，動脈硬化巣の免疫蛍光染色により，平滑筋細胞およびマクロファージを染色し，動脈硬化巣の性状・構成細胞を比較した．加えて申請者は，昨年度に同定したmiR-335のターゲット遺伝子CHFRについて，3’UTRレポーターアッセイを行い，miR-335との直接的結合を証明した．これらにより，血管内皮細胞においてmiR-335によるNFκBの活性化機序を明らかにした．