培養声帯粘膜におけるバリア機能の傷害と修復の評価

昨年度は声帯上皮粘膜の上皮バリア機能の傷害と治癒過程を観察するためのin vitroモデルにて、タイトジャンクション機能が傷害後どのように変化するのか評価することを目的に　透過型電子顕微鏡にて細胞微小構造を観察することや、ビオチン化試薬透過性試験を試みた。電子顕微鏡での観察については正常状態での観察は可能であったが、傷害後の観察は変性が強く観察が困難であった。ビオチン化試薬透過性試験に関しては培養細胞が非常に薄い構造であるため、透過評価がうまくできず断念した。昨年以前の研究成果をあわせた概要は以下の通りである。声帯粘膜上皮由来培養細胞の上皮バリア機能はpH4の培地を一定時間曝露するという酸傷害で経上皮電気抵抗（TEER）が80％程度まで悪化するという機能低下を認めるが細胞死はLive dead stainで増加しないことを確認した。さらにTEERは24時間後に回復することを確認した。さらに、2mg/mlペプシン付加することでTEERは酸単独より悪化し60％前後になることがわかった。一方で細胞表面に有る微絨毛を走査型電子顕微鏡で確認すると酸傷害で微絨毛は減少するが、ペプシンの付加を行っても微絨毛の減少程度は酸傷害単独時のそれと同等であった。上皮バリア機能に影響を与える傷害は様々な種類があり、傷害の種類によって機能不全に陥る部位に違いが有ることがわかった。現在分かっている内容で論文にまとめるため現在研究内容をまとめて論文執筆中である。

昨年度は声帯上皮粘膜の上皮バリア機能の傷害と治癒過程を観察するためのin vitroモデルにて、タイトジャンクション機能が傷害後どのように変化するのか評価することを目的に　透過型電子顕微鏡にて細胞微小構造を観察することや、ビオチン化試薬透過性試験を試みた。電子顕微鏡での観察については正常状態での観察は可能であったが、傷害後の観察は変性が強く観察が困難であった。ビオチン化試薬透過性試験に関しては培養細胞が非常に薄い構造であるため、透過評価がうまくできず断念した。昨年以前の研究成果をあわせた概要は以下の通りである。声帯粘膜上皮由来培養細胞の上皮バリア機能はpH4の培地を一定時間曝露するという酸傷害で経上皮電気抵抗（TEER）が80％程度まで悪化するという機能低下を認めるが細胞死はLive dead stainで増加しないことを確認した。さらにTEERは24時間後に回復することを確認した。さらに、2mg/mlペプシン付加することでTEERは酸単独より悪化し60％前後になることがわかった。一方で細胞表面に有る微絨毛を走査型電子顕微鏡で確認すると酸傷害で微絨毛は減少するが、ペプシンの付加を行っても微絨毛の減少程度は酸傷害単独時のそれと同等であった。上皮バリア機能に影響を与える傷害は様々な種類があり、傷害の種類によって機能不全に陥る部位に違いが有ることがわかった。現在分かっている内容で論文にまとめるため現在研究内容をまとめて論文執筆中である。