RNAダイナミクスの学理構築とRNA標的薬剤アッセイ系の構築

点击翻译按钮获取中文摘要

２０２２年度は、２０２１年度に確立したRNA構造転移の測定法の１つである、三重項－三重項エネルギー移動を利用した、RNA構造転移の測定法を用いて、ＤＮＡ、ＲＮＡダイナミクスを調べた。片方の末端に1分子蛍光観測が可能である光耐久性の高い蛍光分子ＡＴＴО647Ｎ、もう片方の末端に三重項エネルギーのアクセプター、兼、光安定化剤として1,4,5,8-cyclooctatetraene（ＣОＴ）を導入した1本鎖DNA、および、1本鎖ＲＮＡを合成し、蛍光相関分光法を用いた蛍光ブリンキング測定により、1本鎖ＤＮＡ、ＲＮＡの末端衝突ダイナミクス測定を行った。この際、PEG20,000などのモレキュラークラウディング剤による分子夾雑環境がＲＮＡダイナミクスに与える影響を同時に検証した。また、局所的なＲＮＡ構造中の塩基対の解離を検証するための手法開発に取り組んだ。1分子測定により得られるデータはバイナリデータとして得られるが、Pythonを用いたプログラム開発により、複数のデータをクリック1つで解析可能となった。また、１連のデータにおいても、自在に時間を区切りながら蛍光ブリンキングパターンを解析することができるようになった。これにより、時間経過とともに蛍光ブリンキングパターンに変化を生ずるか、否かを、短時間で検証可能となり、ブリンキングパターンの変化を通してＲＮＡ構造転移を調べると言う、ＲＮＡダイナミクスを測定する新たな手法開発に成功した。