权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

リボソームRNAの転写を促進する場の試験管内再構成とその破綻

促进核糖体RNA转录及其破坏的场的体外重建

基本信息

批准号：
21H02535
负责人：
井手聖
金额：
$ 10.73万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では核小体の機能に液―液相分離がどのように寄与するのかを明らかにすることを目的とする。具体的には、rRNAの転写を担う分子からなる中心層FCに着目し、精製したタンパク質UBF、rDNA、RNAを用いて、rRNAの転写活性時のFCの再構築を試みている。本年度では前年度の結果を踏まえて以下に示す３つの成果を得た。(i) 細胞内でrRNAの転写は中心層FCの縁で起こる。つまり、転写の鋳型であるrDNAが中心層の縁に局在する。組換えタンパク質UBFを試験管内で相分離させ、形成した液滴にrDNAを混ぜ、その局在が再現できるかを試みた。rDNAの遺伝子コーディング領域（CDS）だけを混ぜた場合、液滴全体に均一に分布する。一方で、CDSに遺伝子間領域（IGS）を融合すると、CDSが液滴の縁にたまるようになることがわかった。IGSは相分離の作用で液滴から排除され、その外縁部に局在していた。このことから、相分離の作用を介して核小体内でrDNA領域の空間配置が決定されることが明らかになった。(ii) rRNAの転写が起こる中心層FCは、核小体内で小さく分散して局在する。液滴であるにもかかわらず近接しても融合しない。この現象を説明するため、前年度までにrRNAの存在下では液滴UBFが相転移しゲル状態になっていることが示唆されていた。そこで今年度では分子のダイナミクスを指標に検証した。蛍光分子プローブについて一分子イメージング法や光褪色後蛍光回復法（FRAP）を用いて調べたところ、予想通りrRNAを添加すると液滴内の分子のダイナミクスは下がることを見出した。(iii) 組換えタンパク質UBFは試験管で液滴を形成する。天然変性領域を欠損させた部分タンパク質を精製することで、UBFアミノ酸配列内での責任領域を相分離の責任領域を同定した。

In this study, nucleosome separation was performed by liquid-liquid phase separation. For the specific information and rRNA, the center of the molecular information center will check the target, and carefully check the UBF, rDNA, RNA, and rRNA. When you write the activity, the FC will register the activity again. The results of the previous year of this year and the results of the previous year are shown in the following table. (I) the intracellular rRNA write the center of the FC cell. The center of the rDNA center is in the middle of the game. The UBF will be separated in the tube, the droplets will be mixed with rDNA, and the local office will try again. RDNA droplets are uniformly distributed in all droplets in the field of field (CDS). On the one hand, the CDS intersub-domain (IGS) is integrated with the CDS droplet and the liquid droplet. IGS "phase separation" action droplets "exclusion", "external" department "bureau" in the "phase separation". It is necessary to determine the configuration of the rDNA domain space in the nuclear body of the nuclear body by means of phase separation and phase separation. (ii) rRNA writes that the center is FC, the nucleosome is small, the body is dispersed, and the center is located. The droplets are close to each other and fused together. In the presence of the previous year's rRNA, the droplet UBF phase shift indicates that the droplet phase shifts the status of the droplet. I don't know what to do this year. I don't know what to do this year. Photoluminescence (FRAP) method was used to detect the molecular weight in the droplet. After the light faded, the light return method (FRAP) was used to add the molecule in the droplet. (iii) make sure that the droplets in the UBF tube are formed. In the field of natural sex, there is a lack of information on the part of the system, and in the case of UBF acid, the phase separation in any field is the same as that in any field.