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Development of a novel liver disease model using genetically modified human induced pluripotent stem cells and analysis of fibrosis mechanisms

利用转基因人诱导多能干细胞开发新型肝病模型并分析纤维化机制

基本信息

批准号：
21H02710
负责人：
木戸丈友
金额：
$ 11.07万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02710/
关键词：
肝臓 iPS細胞肝疾患線維化ヒトiPS細胞肝硬変肝星細胞

项目摘要

本研究では、ヒトiPS細胞からの肝構成細胞分化誘導技術を基盤として、活性化状態をモニター可能なレポーター肝星細胞を肝オルガノイドに組み込むことで、肝細胞障害から肝線維化・肝硬変へ至る過程をin vitroで再現できる肝疾患モデルの開発を計画している。2021年度までに、ヒトiPS細胞由来の静止期星細胞の活性化をFirefly luciferase（Fluc）で評価し、細胞数をRenilla luciferase（Rluc）で評価する系を確立し、Fluc/Rluc値を算出することで肝星細胞一細胞あたりの活性化割合を算出できることを確認した。また、iPS細胞から調製した静止期肝星細胞とヒト肝がん由来細胞株（HuH-7）を用いて三次元共培養系を作製し、肝障害誘導後に肝星細胞の活性化が誘導される可能性を示した。2022年度は、ヒトiPS細胞由来の静止期肝星細胞とヒト初代培養肝細胞の共培養系を作製するため、培養条件を検討した。肝星細胞培養用培地と肝細胞培養用培地を種々の割合で混合し、ヒトiPS細胞由来肝星細胞を培養した結果、肝細胞培養用培地にROCK阻害剤を添加した培地で細胞を維持できることが分かった。また、ヒトiPS細胞から静止期肝星細胞、活性化肝星細胞を調製し、RNAseqを実施した。GO解析、KEGGパスウェイ解析を行い、Neuron、細胞分裂、細胞外基質、発生に関与する遺伝子群に変化が認められた。

This study aims to establish a baseline for the induction of differentiation of liver constitutive cells from iPS cells, and to develop a plan for the development of liver disease cells from hepatocyte dysfunction to cirrhosis. In 2021, the activation of Firefly luciferase (Fluc), the number of cells and Renilla luciferase (Rluc) of iPS cells were evaluated. The Fluc/Rluc value was calculated. The activation of one cell of hepatic stellate cells was calculated. To demonstrate the possibility of activation induction of hepatic stellate cells after induction of liver injury, a three-dimensional co-culture system was used to prepare hepatic stellate cells at resting stage and to induce hepatic stellate cells at resting stage (HuH-7). In 2022, the origin of iPS cells and the co-culture system of primary cultured hepatocytes were discussed. Culture medium for hepatocyte culture, culture medium for hepatocyte culture, culture, culture medium for hepatocyte culture, culture medium for hepatocyte culture, culture, culture medium for hepatocyte culture, iPS cells, quiescent hepatic stellate cells, activated hepatic stellate cells, and RNAseq are regulated. GO analysis, KEGG analysis, Neuron, cell division, extracellular matrix, development, and genetic differentiation

项目成果

期刊论文数量（17）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

ヒトiPS細胞技術を用いた肝線維症治療薬の開発

利用人类 iPS 细胞技术开发肝纤维化治疗方法

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
木戸丈友;中野泰博;大栗博毅;宮島篤
通讯作者：
宮島篤

Influence of CPM-dependent sorting on the multi-omics profile of hepatocyte-like cells matured in microscale biochips

CPM依赖性分选对微型生物芯片中成熟的肝细胞样细胞多组学特征的影响

DOI：
10.1016/j.bej.2022.108408
发表时间：
2022
期刊：
Biochemical Engineering Journal
影响因子：
3.9
作者：
Mathieu Danoy;Stephane Poulain;Benedikt Scheidecker;Rachid Jellali;Yannick Tauran;Marjorie Leduc;Johanna Bruce;Francoise Gilard;Bertrand Gakiere;Hiroshi Arakawa;Yukio Kato;Soo Hyeon Kim;Taketomo Kido;Atsushi Miyajima;Yasuyuki Sakai;Eric Leclerc
通讯作者：
Eric Leclerc

活性化星細胞を脱活性化する方法

如何停用激活的星状细胞