過剰中心体収束の阻害による癌治療戦略の新規標的分子探索

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癌細胞の特性の一つに過剰中心体があり、申請者らは、肺癌細胞でサイクリン依存性キナーゼ2（CDK2)の阻害により細胞分裂時の過剰中心体収束が阻害され、多極性細胞分裂により細胞死に至るanaphase catastropheが誘導されることを報告した（Kawakami M et al. J Natl Cancer Inst.2017; Kawakami M et al. Mol Cancer Ther.2018)。しかしCDK2は正常細胞の細胞周期進行にも重要で、癌の治療標的として最適ではない。本研究では、CDK2以外でanaphase catastropheを誘導する治療標的を同定し、癌治療機構として確立することを目指している。その有力候補としてキネシンタンパクであるKIFC1の肺癌における治療標的の可能性の検証のために、2021年度にRNA、蛋白でノックダウンを確認したsiRNAを用いて、昨年度は機能解析を進めた。複数の肺癌細胞株でKIFC1のsiRNAによるノックダウンで細胞増殖抑制効果を確認できたが、さらなる機能解析のために、siRNAによる一時的なノックダウンでなく、長期的なKIFC1ノックアウトの安定細胞株が望ましいと考え、レンチウィルスを用いたCRISPR-Cas9システムを導入することとし、まず、KIFC1のDNA配列に相補的なガイドRNAを複数設計した。次に設計したガイドRNAとCas9のレンチウィルスベクターの構築に着手した。現在は構築したレンチウィルスベクターを用いて、標的配列部位のDNAシークエンス及びウェスタンブロットによりKIFC1ノックアウト効率を確認中である。また、並行して、KIFC1の特異的阻害剤(CW069、AZ82)による解析も進めており、これまでに、複数の肺癌細胞株においてAZ82の細胞増殖抑制効果を確認した。