Comprehensive study on establishment of pulp regenerative therapy based on the scientific evidences

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令和3年度に引き続いて以下の実験を実施した。歯根形成中期、後期、完成期に該当する5、8および11週齢のWistar系ラットの下顎左側第一臼歯に対して、Edanami et al.JDR, 2020に従って再生歯内療法(regenerative endodontic procedure: REP)処置を施した。近心根の根尖孔から0.8mm上部までの歯髄を除去後、根管内を血餅で満たし、MTAを塗布し、フロアブルコンポジットレジンで充填した。28日後に下顎骨を摘出し、4週間脱灰後、パラフィン切片を作成し、H-E染色、Dentin sialoprotein、Nestinおよび Periostinの免疫組織学的解析による根管内の治癒形態およびDAMT量の評価、MSCマーカーであるalpha-smooth muscle actin(α-SMA)、CD73、CD90およびCD146を免疫組織学的に解析し、MSCの局在解析、さらにCD68とCD206とを免疫蛍光二重染色してM2Mφを局在解析した。未処置の根管内歯髄および根尖部では、α-SMAおよびCD73は歯根の発達とともに根尖部での陽性反応が著明に減少したが、CD90およびCD146では変化はなかった。REP処置28日後では、週齢の増加に伴いDAMT・歯髄様組織の治癒形態を示す頻度が減少し、DAMT形成量の減少を認めた。α-SMAの免疫組織学的解析では、週齢の増加に伴い根尖部の陽性領域が減少する一方で、根管内の新生軟組織においてMSCの細胞形態を有するα-SMA陽性細胞が増加した。また、根尖部および根管内新生軟組織においてMSCの細胞形態を有するCD73、CD90およびCD146の陽性細胞が著明に増加した。さらに、週齢の増加に伴いCD68とCD206の二重陽性細胞が根尖部および根管内新生軟組織でも著明に増加した。