プロテオミクス解析手法を用いたビワアレルゲンの網羅的解析

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これまでにビワ蛋白質の抽出、精製条件を詳細に検討した報告がないため、ビワ蛋白質の最適な抽出、精製条件を検討し、ビワアレルゲン蛋白質解析のためのビワ蛋白質の抽出、精製を進めている。精製した蛋白質溶液を用いて、SDS－PAGEによる分離確認と1次元ウェスタンブロッティングを行い、シグナル検出を検討している。1次抗体としてヒト血清を使用し、2次抗体として抗ヒトIgE、IgA+IgG+IgMの2種類を使用し、1次元ウェスタンブロッティングを施行している。また、2次元電気泳動も、ウェスタンブロッティングを用いて施行している。使用する抗体は、1次抗体としてヒト血清を使用し、2次抗体としては、1次元ウェスタンブロッティングで反応のあった抗ヒトIgE、IgA+IgG+IgMの抗体を使用している。ウェスタンブロッティングを用いた2次元電気泳動について、ビワアレルギーの患者血清を作用させ、マッチングした抗原スポットの切り抜き、抗原スポットの蛋白質解析を試みている。トリプシン消化ペプチド単位で解析を行っているが、現在、ビワの蛋白質のデータベースがないため、LC-MS/MSによるタンパク質同定が困難となっており、ビワ属を含むバラ科のアミノ酸配列データベースを参照し、同定する方法を検討している。完全一致する配列情報が存在すれば、同定できる可能性はあるが、もし、完全一致する配列情報が存在しなければ、マススペクトルから配列を読み取るデノボ配列分析を行い、読み取った配列のBLAST検索を行い、相同性のあるタンパク質を検索することを検討している。