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脊髄損傷への移植細胞の選択・化学的刺激による神経成熟・髄鞘化の促進と運動機能改善

通过选择和化学刺激移植细胞治疗脊髓损伤，促进神经元成熟和髓鞘形成并改善运动功能

基本信息

批准号：
19K18541
负责人：
河合桃太郎
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

hM3Dq を発現するレンチウイルスを作成した。作成したレンチウイルスを用いて、iPS 細胞由来の神経前駆細胞にhM3Dq を発現させた。発現させたhM3Dq がClozapine N-oxide（CNO）に反応して細胞内Ca 濃度を変化させることをCa イメージングの手法で確認した。Ca 上昇後に神経細胞の活動性の上昇がおこることをImmediate early genes の発現量の定量によって確認をした。更にhM3Dq発現細胞はCa 上昇に引き続いて周囲のhM3Dq非発現細胞を活性化させることを同様に確認した。同様の神経前駆細胞を脊髄損傷後のマウスに移植をして、連日CNO を腹腔内投与することで移植細胞を選択的に刺激した。42日間の観察で、移植に加えてCNO を腹腔内投与した群(CNO投与群)で運動機能が回復することを様々な運動機能評価によって確認をした。CNO による細胞刺激によって、移植組織中で変化が起こっている変化を移植後脊髄のRNA sequenceによって検討した。損傷後14日のマウスにおいて、CNO投与群では非投与群と比較しシナプスに関連する遺伝子群で発現上昇が起こっていることを確認した。Gene Ontology 解析やGene Set Enrichment Analysis においても同様にシナプス関連の遺伝子の発現上昇が起こっていることを確かめた。更にSyn1やvGLUT1やvGATといったシナプスに関連するタンパク質についても同様にCNO投与群で発現上昇が起こっていることをcapillary electrophoresisで定量し確認した。これらの検討から、CNO 投与による選択的な移植細胞の刺激によって、移植細胞と移植部周囲のマウスの細胞の間でシナプス伝達を亢進させることが運動機能の改善に寄与することが考えられた。

The hM3Dq system shows that it is not possible to make a success. To make the cell hM3Dq the origin of the cell, the origin of the cell, the hM3Dq of the cell, and the origin of the cell. The hM3Dq Clozapine N-oxide (CNO) was detected, and the intracellular Ca was detected. The intracellular Ca was detected. The Ca was detected. On the Ca, you can check the activity of the cell, the Immediate early genes, the quantity, the quantity. To make sure that the hM3Dq is not active in the hM3Dq, you can make sure that it is the same as before. In the same way as before and after the transplantation, CNO was injected intraperitoneally with the selected stimulation. After 42 days of monitoring and transplanting, the CNO was injected into the abdominal cavity and the group (CNO) was injected into the abdominal cavity. The machine was able to check and confirm the crash. After CNO transplantation, the spinal cord was stimulated by cellular stimulation, and the transplant tissue was affected. The post-transplant spinal cord was affected by RNA sequence infection. The following 14 days after the election, the CNO vote and the group vote will not be compared to the group vote, and the sub-group will now start to check. Gene Ontology parses "Gene Set Enrichment Analysis" and "make sure that you are sure" from now on. Syn1