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角膜実質細胞の分化における小胞体ストレス応答の働き

内质网应激反应在角膜细胞分化中的作用

基本信息

批准号：
19K18879
负责人：
宮城秀考
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス胚線維芽細胞を2ng/ml TGF-βで刺激し筋線維芽細胞への分化を促すと、小胞体ストレスマーカーであるBiPやspliced XBP-1の遺伝子発現が誘導されることから、小胞体ストレスが起きていることが示唆された。また、小胞体ストレス応答経路の主要な３つのセンサータンパクであるPERK、IRE1、ATF6それぞれをノックアウト、またはノックダウンしたマウス胚線維芽細胞をTGF-βで刺激し、それぞれの筋線維芽細胞への分化をα-smooth muscle actinの遺伝子発現で評価すると、PERKをノックアウトしたマウス胚線維芽細胞においては発現が抑制された。以上のことから線維芽細胞から筋線維芽細胞への分化には小胞体ストレス応答経路の内、主にPERK経路が関わっていることが示唆された。並行して、野生型マウスの角膜を採取し、disc上で培養することでマウスの角膜実質細胞を分離培養する手技を確立した。また、ヒト強角膜片から角膜実質を切り出し、dish上で培養することで角膜実質から線維芽細胞を初代培養することに成功した。初代培養したヒト角膜実質細胞を様々な条件の器質上で培養するため、ヒト角膜の硬さを模した25ｋPa（正常角膜）と75ｋPa（線維化した角膜）のハイドロゲルを作成する手技を確立した。また、細胞培養可能になるようハイドロゲルの細胞毒性を無くす最適な洗浄法を決定した。その後、新型コロナウイルス感染症流行のため研究は中断していた。この度、研究代表者の異動により研究継続ができなくなったため廃止申請を行った。

TGF-β 2 ng/ml stimulated the differentiation of embryonic cells, and the expression of bi-spliced XBP-1 gene was induced. PERK, IRE1 and ATF6 are the main components of the microcellular response pathway. TGF-β stimulation is used to inhibit the development of α-smooth muscle actin gene in embryonic cells. The differentiation of the cell line and the cell line in the cell line and the differentiation of the cell line and the cell line in the cell line are related to the differentiation of the cell line and the cell line. Corneal cells from wild type and parallel type were isolated and cultured on a disc. Corneal cells were cultured on dish and cultured successfully in primary culture. In primary culture, corneal stromal cells were cultured organically and the corneal hardness was measured at 25kPa (normal cornea) and 75kPa (linear cornea). Cell culture may be used to determine the cytotoxicity of the cells. The epidemic of new infectious diseases has been interrupted. The research representative's change of degree and research status will be discussed in detail.