iPS細胞の初期化機構の個体差解明を介した新規再生歯科補綴治療の探索

通过阐明iPS细胞重编程机制的个体差异，探索新的再生假牙治疗方法

• 批准号: 19K19115
• 负责人: 鎌野 優弥
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K19115/
• 关键词: iPS細胞; 補綴歯科学; 再生医療

使用する細胞の効率的な浮遊培養法の確立を行った。接着培養と比較して，浮遊培養では一度に大量の細胞を培養でき，遺伝子導入の際の試薬の量を節減し，費用や時間を節約することが可能となる。遺伝子導入を行う際のコストも浮遊培養のほうが圧倒的に安価となり，その意義は大きい。まずタイテック社製の振盪培養器を用いて，温度，振動数，二酸化炭素濃度等の条件を検討した。その結果，37度・120rpm・8%二酸化炭素濃度で使用する細胞が最も増殖することが明らかとなった。次に使用するベクターの構築を行った。エントリーベクターをNBRC(NITE)より購入し，LRクローニングによりデスティネーションベクターに導入した。デスティネーションベクターの選考基準として発現効率・タグの付与・非ウイルス性等を考慮した。結果NativePure pcDNA Gateway Vectorが目的に適しており，これを選択した。このベクターはそれぞれC末端およびN末端にV5タグが付与されているものがあり，V5タグの位置やエントリーベクターの組み合わせによりタグを付与しないベクターを作製できることもメリットである。浮遊培養環境下で作製したベクターを導入し，目的のタンパク質が発現していることが確認された。今後タンパク質の構造解析等を行う予定であったが，申請者の異動に伴い１年目で研究が廃止となった。今後，資格が回復した際には改めて申請行い継続していく所存である。

Establishment of a method for the efficient use of cell culture. Then, compared with culture, it is possible to culture a large number of cells in suspension culture, reduce the amount of test materials during gene introduction, and save both cost and time. The significance of the introduction of the gene into the culture medium is great. The temperature, vibration number and carbon dioxide concentration of the shaker were investigated. As a result, 37 ° C·120rpm·8% of the carbon dioxide concentration was used to increase the cell growth rate. The next step is to build a new building. NBRC(NITE) is the leading provider of information on the Internet. The selection criteria of the model and the performance of the model are considered. NativePure pcDNA Gateway Vector was selected for this purpose. The V5 is connected to the C terminal and the N terminal. In the floating culture environment, the control system is introduced, and the purpose of the system is confirmed. In the future, the quality of the structure analysis will be determined. From now on, the qualification will be restored to the existing status.