口腔癌患者の唾液中におけるエクソソームとmiRNA

口腔癌患者唾液中的外泌体和 miRNA

• 批准号: 19K19150
• 负责人: 金山 純一
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K19150/
• 关键词: miRNA; 炎症性サイトカイン; 唾液; IL-17; 超遠心分離法; サイズ排除クロマトグラフィー; 口腔癌; エクソソーム; フローサイトメトリー

癌細胞は、細胞質内で不要になったタンパク質やアミノ酸などを「エクソソーム」と呼ばれる膜の構造体で包んだ上で、細胞外へ輸送している。エクソソームの中にはmiRNAが含まれていることが知られている。申請者らは、唾液中のエクソソームとmiRNA、さらには炎症性タンパクに着目し、口腔カンジダ症患者、口腔癌患者の唾液中のmiRNA、炎症性タンパクを探索、同定することで、疾患の病態解明、早期発見、早期治療可能にすることを目的とした。具体的には、唾液中からエクソソームとmiRNAの回収、炎症性サイトカイン解析について基礎的な研究を行った。唾液中のエクソソームは検出可能であると考えられ、特定のmiRNAの発現が口腔がんの重症度とリンクする可能性があった。また、血漿成分は95%以上がグロブリン・アルブミンであり、夾雑物の多さが血中バイオマーカー探索の妨げとなっていた。それだけでなく、高塩濃度、各種プロテアーゼやRNaseの存在から、サンプル抽出における再現性の低下も臨床応用における問題点であった。超遠心分離法(UC)により唾液中のmiRNAの回収は可能であった。また、フローサイトメトリーによる唾液中の6つの炎症性サイトカインの解析は可能であった。しかしながら、臨床の現場において、超遠心分離法で唾液からエクソソームを回収するのは時間と労力がかかる。そのため、qEVカラムを用いてサイズ排除クロマトグラフィー法（SEC）による高純度なエクソソームを短時間で回収するpreliminaryな検討を行い、高純度のエクソソームが回収できていることを確認中である。また、フローサイトメトリーを用いて、唾液からのIL-2,IL-4,IL-6,IL-17,TNF-αなどの炎症性サイトカインの同定が可能であった。

Cancer cells contain intracellular and extracellular components. The miRNA in the middle of the game is contained in the game. The applicant is interested in exploring miRNA in saliva, inflammatory disease, oral cancer patients, and inflammatory disease in saliva, identifying disease pathologies, early detection, and early treatment possibilities Specific research on miRNA recovery and inflammatory response in saliva The possibility of miRNA detection in saliva and the possibility of miRNA detection in oral cavity More than 95% of the plasma components are found in the blood. There are problems with high concentrations, presence of various RNases, low reproducibility and clinical use. Ultra-central isolation (UC) may be used to detect miRNA in saliva. 6. Inflammatory substances in saliva In the field of clinical medicine, ultra-telecentric separation of saliva can be used to improve the recovery time. The SEC method is used to determine whether a high purity product can be recovered in a short time. IL-2,IL-4, IL-6, IL-17,TNF-α,IL-4,IL-6,IL-7,IL-6,IL-7, IL-7, IL-8, IL-8, IL-9, IL-10, IL-9, IL-9, IL-10, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-9, IL-9, IL-10, IL-11, IL-17,TNF-9, IL-9, IL-10, IL-17,TNF-9, IL-9, IL