自己末梢血単核球の効率的な定着による重症下肢虚血の治療

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本研究の目的は、移植した末梢血単核球が放出するサイトカイン、液性因子による重症下肢虚血治療である。末梢血単核球のハイドロゲル包埋により移植細胞の遊走を阻害し、移植部位に高効率に長期間留まることで、末梢血単核球が放出するサイトカイン、液性因子によるパラクリン効果増強が期待できる。これまでに、末梢血単核球の回収・評価およびラット重症下肢虚血モデルの作製・評価法の確立を行った。まず、SDラット(10週齢、♂)から末梢血単核球をFicoll法により回収した。血球計数装置での評価により単核球成分が83±3%から96±2%に濃縮されることが分かった。次に、SDラット(８週齢、♂)の腸骨動脈を二重結紮し、大腿動脈・大腿深動脈を単結紮することで、重症下肢虚血モデルを作製した。血色不良ならびに60-70%程度の慢性的な血流の低下(レーザースペックル血流計による)を確認した。また、結紮10日後に5.0x10^6個の末梢血単核球を大腿筋に移植した場合、結紮28日後には未投与群と比較して50%程度の血流改善が見られた。本年度は、末梢血単核球のハイドロゲル包埋を行った。Cell-in-a-Boxというキットを用いて実施した。本ハイドロゲルは硫酸セルロースおよびカチオン性ポリマーがベースとなっている。本キットにより末梢血単核球がハイドロゲルで包埋できること、およびゲル包埋に伴う生存率の低下が見られないことが分かった。本年度はCovid-19に伴う緊急事態宣言もあり、移植まで進めることは出来なかった。