mecAを標的としたMRSAに対する抗菌ファージの開発

针对 mecA 的抗 MRSA 抗菌噬菌体的开发

• 批准号: 19K23807
• 负责人: アザム アア
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-08-30 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K23807/
• 关键词: 黄色ブドウ球菌; SaPI; CRISPR-C2c2; バクテリオファージ; Staphylococcus aureus; CRISPR-Cas13a

本研究では、薬剤耐性黄色ブドウ球菌を選択的に殺菌する抗菌ファージの開発を目的とした。申請者は、耐性菌を選択的に殺菌する抗菌ファージシステムとして、細菌の保有する適応免疫機構（CRISPR-Casシステム）の一つであるCRISPR-C2c2をファージに搭載することを考えた。まず初めに、C2c2をバクテリオファージに搭載した。この搭載には、黄色ブドウ球菌の病原性遺伝子塊（SaPIs）を利用した。SaPIは、黄色ブドウ球菌染色体上に存在するファージ様の構成因子を持つ移動性遺伝子領域であり、特定のファージ（ここでは、SaPIを誘発するファージなのでヘルパーファージと呼ぶ）の内部に入り込むことができる。我々は、SaPIがファージをハイジャックする特徴を生かし、C2c2をファージに搭載させることにした。具体的な手法としては、SaPI領域にC2c2を組み込んだ（SaPI-C2c2の作成）後に、マイトマイシンC添加でSOS応答を引き起こした。SOS応答はヘルパーファージとSaPI-C2c2の活性化を誘発し、SaPI-C2c2はヘルパーファージをハイジャックするため、C2c2を搭載した抗菌ファージが次々と生成されるはずであり、実際にSaPIを用いたCRISPR-C2c2の搭載に成功したことをトランスダクションアッセイにより確認した。また、C2c2搭載ファージの有効性を評価するために、MRSAを選択的に殺菌できるか否かを調べた。in vitroでは重層寒天培地上にMRSAを撒き、その上から抗菌キメラファージを添加、殺菌斑を確認することで、抗菌キメラファージが薬剤耐性黄色ブドウ球菌を選択的に殺菌することを確認した。

This study で は, 薬 tonic patience yellow ブ ド ウ aureus を sentaku に antiseptic す る antibacterial フ ァ ー ジ の open 発 を purpose と し た. Applicants は, resistant bacterium を sentaku に antiseptic す る antibacterial フ ァ ー ジ シ ス テ ム と し て, bacteria の retain す る optimum 応 immune institutions (CRISPR - Cas シ ス テ ム) の a つ で あ る CRISPR - C2c2 を フ ァ ー ジ に carry す る こ と を exam え た. Youdaoplaceholder0 initial めに, C2c2をバ テリ テリ ファ ジに ジに ジに are equipped with た. The <s:1> ブドウ carried に, yellow ブドウ cocci <s:1> pathogenic progeny 伝 sub-block (SaPIs) を utilized た. SaPI は, yellow ブ ド ウ aureus on chromosome に exist す る フ ァ ー ジ others を hold つ の constitute factor mobility heritage 伝 sub-fields で あ り, specific の フ ァ ー ジ (こ こ で は, SaPI を 発 lure す る フ ァ ー ジ な の で ヘ ル パ ー フ ァ ー ジ と shout ぶ) の internal に into り 込 む こ と が で き る. I 々 は, SaPI が フ ァ ー ジ を ハ イ ジ ャ ッ ク す る, 徴 を raw か し, C2c2 を フ ァ ー ジ に carry さ せ る こ と に し た. Specific な gimmick と し て は, SaPI に C2c2 を group み 込 ん だ (SaPI - C2c2 の made after に, マ イ ト マ イ シ ン C add で SOS 応 answer を lead き こ し た. SOS 応 answer は ヘ ル パ ー フ ァ ー ジ と SaPI - C2c2 の activeness を 発 lure し, SaPI C2c2 は ヘ ル パ ー フ ァ ー ジ を ハ イ ジ ャ ッ ク す る た め, C2c2 を carry し た antibacterial フ ァ ー ジ が times 々 と generated さ れ る は ず で あ り, be interstate に SaPI を with い た CRISPR - C2c2 の carry に into Work to confirm によ た とをトラ とをトラ スダ ショ ショ アッセ によ によ た た. ま た, C2c2 carry フ ァ ー ジ の have sharper sex を review 価 す る た め に, MRSA を sentaku に antiseptic で き る か no か を adjustable べ た. Sees the in vitro で は heavy layer from the ground に MRSA を き and そ の on か ら antibacterial キ メ ラ フ ァ ー ジ を add, kill plaque を confirm す る こ と で, antibacterial キ メ ラ フ ァ ー ジ が 薬 tonic patience yellow ブ ド ウ aureus を sentaku に antiseptic す る こ と を confirm し た.

项目成果

The contribution of nitrate-reducing bacterium Marinobacter YB03 to biological souring and microbiologically influenced corrosion of carbon steel

• DOI: 10.1016/j.bej.2020.107520
• 发表时间: 2020-04
• 期刊: Biochemical Engineering Journal
• 影响因子: 3.9
• 作者: Sokunsreiroat Yuk;Kamarisima;A. Azam;K. Miyanaga;Y. Tanji

Characterization of Pseudomonas lytic phages and their application as a cocktail with antibiotics in controlling Pseudomonas aeruginosa

• DOI: 10.1016/j.jbiosc.2020.02.001
• 发表时间: 2020-06-01
• 期刊: JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING
• 影响因子: 2.8
• 作者: Ong, Soo Peng;Azam, Aa Haeruman;Tanji, Yasunori
• 通讯作者: Tanji, Yasunori

Development of CRISPR-Cas13a-based antimicrobials capable of sequence-specific killing of target bacteria

• DOI: 10.1038/s41467-020-16731-6
• 发表时间: 2020-06-10
• 期刊: NATURE COMMUNICATIONS
• 影响因子: 16.6
• 作者: Kiga, Kotaro;Tan, Xin-Ee;Cui, Longzhu
• 通讯作者: Cui, Longzhu

Composition and Diversity of CRISPR-Cas13a Systems in the Genus Leptotrichia

• DOI: 10.3389/fmicb.2019.02838
• 发表时间: 2019-12-10
• 期刊: FRONTIERS IN MICROBIOLOGY
• 影响因子: 5.2
• 作者: Watanabe, Shinya;Cui, Bintao;Cui, Longzhu
• 通讯作者: Cui, Longzhu