Vaccine development of mosquito-borne infectious diseases using molecular controllable multiple antigen-displaying virus-like particles

利用分子可控多重抗原展示病毒样颗粒开发蚊媒传染病疫苗

• 批准号: 20H00411
• 负责人: 朴 龍洙
• 金额: $ 28.7万
• 依托单位: Shizuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H00411/
• 关键词: ウイルス様粒子; カイコ; 蚊媒介感染症; 抗原提示ウイルス様粒子; ワクチン; 抗原提示型ウイルス様粒子; 抗原提示; エンベロープ; デングウイルス; 磁性ナノ粒子; タンパク質精製; マラリア抗原; 磁気ナノ粒子; 多抗原提示型ウイルス様粒子

(1)SC/ST化学修飾による多価VLPの作製：ノロウイルス様粒子（NoV-LP）にSpyTag (ST)を融合したNoV-LP、SpyCatcher (SC)にEGFPを融合したSC-EGFP及びm-Cherryを融合したSC-Cherryを共発現したところ、EGFPとm-Cherryを提示したNoV-LPの形成を確認した。Merozoite surface proteinとCircumsporozoite protein抗原CSPΔTM、MSPΔTM及びpfMSP1-19をカイコで発現し得られたタンパク質をそれぞれ1.5 mg, 2.5 mg, 1.8 mg及び1.8 mgを得、動物試験に供した。(2）ナノ粒子の機能化：Flagタグを連結した4価DENV-LPをカイコで発現し、Flagタグを修飾した磁気ナノ粒子（MNP）で精製したところ、DENV-LP/CprMEは、カイコ１頭当たり43 μg、prMEの場合10 μgの精製タンパク質（回収率69ー79％）を回収した。(3) 動物実験：カイコで発現・精製したDENV-LP/1-4CprME及びDENV-LP/1-4prMEを、２週間間隔で2回マウスに免疫を行った。DENV-LP/CPrMEがDENV-LP/prMEよりも強い免疫応答を示し、最も高い活中和活性を示した。マラリアの抗原CSPΔTM、MSPΔTM及びpfMSP1-19を2週間間隔2回マウスに免疫を行い、免疫63日後Plasmodiuim yoelli XL原虫を攻撃し、血清の赤血球内寄生生殖変化（parasitemia）を調べたところ、抗体は産生したものの、パラシテミアの値は対照実験と大きな差はなかった。この結果は、P. yoelliは本抗原の評価系としては不適切であると判断し、今後P. yoelli評価系に適した抗原を用いる予定である。

（1）通过SC/ST化学修饰制备多价VLP：与诺如病毒样颗粒（Nov-LP）融合的Nov-LP用Spytag（ST）融合，并与Sc-Cherry融合了SC-Cherry与Spycatcher（SC）与EGFP和M-Cherry融合，以形成eGFP和M-Cherry的Nov-LPS。获得了蚕的蛋白质表面蛋白和割孢子蛋白抗原，MSPΔTM和PFMSP1-19的蛋白质所获得的蛋白质，分别获得1.5 mg，2.5 mg，1.8 mg，1.8 mg和1.8 mg，并接受动物测试。 (2) Functionalization of nanoparticles: When tetravalent DENV-LP linked to a Flag tag was expressed in silkworms and purified using Flag tag-modified magnetic nanoparticles (MNPs), DENV-LP/CprME recovered 43 μg of purified protein (recovery rate of 69-79%) per silkworm, and 10 μg of purified protein (recovery rate of 69-79%). （3）动物实验：用DENV-LP/1-4CPRME和DENV-LP/1-4PRME免疫两次小鼠，以两周的间隔在蚕中表达并纯化。与DENV-LP/PRME相比，DENV-LP/CPRME显示出更强的免疫反应，并且活性中和活性最高。将小鼠与疟疾抗原CSPΔTM，MSPΔTM和PFMSP1-19进行两次免疫，并在63天后攻击了疟原虫XL原生动物，并检查了血清寄生虫。尽管产生了抗体，但寄生虫值与对照实验中的值没有显着差异。该结果表明，假单胞菌不适合该抗原的评估系统，现在将使用适合于P. yoelli评估系统的抗原。

项目成果

静岡大学生物工学研究室

静冈大学生物工程实验室

Identification of secretion domain of Neospora caninum profilin

犬新孢子虫profilin分泌结构域的鉴定

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2019.11.056
• 发表时间: 2020
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Suhaimi Hamizah;Xu Jian;Kato Tatsuya;Setyo Utumo Doddy Irawan;Sekiguchi Tomofumi;Park Enoch Y.
• 通讯作者: Park Enoch Y.

Two-step purification of tag-free norovirus-like particles from silkworm larvae (Bombyx mori)

• DOI: 10.1016/j.pep.2021.106010
• 发表时间: 2021-11-03
• 期刊: PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION
• 影响因子: 1.6
• 作者: Boonyakida，Jirayu;Utomo，Doddy Irawan Setyo;Park，Enoch Y.
• 通讯作者: Park，Enoch Y.

Identification of effective peptide derived from WSSV-VP15 for protection of Masupenaeus japonicus against WSSV

鉴定源自 WSSV-VP15 的有效肽，以保护日本马对虾免受 WSSV 侵害

• 发表时间: 2020
• 作者: Jirayu Boonyakida、Jian Xu、Jun Satoh、Takafumi Nakanishi、Toru Mekata、Tatsuya Kato;and Enoch Y. Park
• 通讯作者: and Enoch Y. Park

Production of dengue virus-like particles serotype-3 in silkworm larvae and their ability to elicit a humoral immune response in mice

• DOI: 10.1186/s13568-020-01087-3
• 发表时间: 2020-08-17
• 期刊: AMB EXPRESS
• 影响因子: 3.7
• 作者: Utomo, Doddy Irawan Setyo;Pambudi, Sabar;Park, Enoch Y.
• 通讯作者: Park, Enoch Y.