Vaccine development of mosquito-borne infectious diseases using molecular controllable multiple antigen-displaying virus-like particles

利用分子可控多重抗原展示病毒样颗粒开发蚊媒传染病疫苗

• 批准号: 20H00411
• 负责人: 朴 龍洙
• 金额: $ 28.7万
• 依托单位: Shizuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H00411/
• 关键词: ウイルス様粒子; カイコ; 蚊媒介感染症; 抗原提示ウイルス様粒子; ワクチン; 抗原提示型ウイルス様粒子; 抗原提示; エンベロープ; デングウイルス; 磁性ナノ粒子; タンパク質精製; マラリア抗原; 磁気ナノ粒子; 多抗原提示型ウイルス様粒子

(1)SC/ST化学修飾による多価VLPの作製：ノロウイルス様粒子（NoV-LP）にSpyTag (ST)を融合したNoV-LP、SpyCatcher (SC)にEGFPを融合したSC-EGFP及びm-Cherryを融合したSC-Cherryを共発現したところ、EGFPとm-Cherryを提示したNoV-LPの形成を確認した。Merozoite surface proteinとCircumsporozoite protein抗原CSPΔTM、MSPΔTM及びpfMSP1-19をカイコで発現し得られたタンパク質をそれぞれ1.5 mg, 2.5 mg, 1.8 mg及び1.8 mgを得、動物試験に供した。(2）ナノ粒子の機能化：Flagタグを連結した4価DENV-LPをカイコで発現し、Flagタグを修飾した磁気ナノ粒子（MNP）で精製したところ、DENV-LP/CprMEは、カイコ１頭当たり43 μg、prMEの場合10 μgの精製タンパク質（回収率69ー79％）を回収した。(3) 動物実験：カイコで発現・精製したDENV-LP/1-4CprME及びDENV-LP/1-4prMEを、２週間間隔で2回マウスに免疫を行った。DENV-LP/CPrMEがDENV-LP/prMEよりも強い免疫応答を示し、最も高い活中和活性を示した。マラリアの抗原CSPΔTM、MSPΔTM及びpfMSP1-19を2週間間隔2回マウスに免疫を行い、免疫63日後Plasmodiuim yoelli XL原虫を攻撃し、血清の赤血球内寄生生殖変化（parasitemia）を調べたところ、抗体は産生したものの、パラシテミアの値は対照実験と大きな差はなかった。この結果は、P. yoelliは本抗原の評価系としては不適切であると判断し、今後P. yoelli評価系に適した抗原を用いる予定である。

(1)SC/ST Chemical Modification: SpyTag (ST) Fusion with NoV-LP, SpyCatcher (SC) Fusion with SC-EGFP and m-Cherry Fusion with SC-Cherry Merozoite surface protein and Circumsporoite protein antigens CSPΔTM, MSPΔTM and pfMSP1 -19 were detected in various concentrations, including 1.5 mg, 2.5 mg, 1.8 mg and 1.8 mg. (2) Functionalization of particles: Flags are linked to each other, DENV-LP is found, Flags are modified, magnetic particles (MNP) are refined, DENV-LP/CprME is recovered, DENV-LP is 43 μg, prME is 10 μg, and refined particles (recovery rate 69 79%) are recovered. (3)Animals: DENV-LP/1 - 4CprME, 2 weeks apart DENV-LP/CPrME is the most active and active medium for immune response. Antigens CSPΔTM, MSPΔTM and pfMSP1 -19 were immunized at 2 weeks intervals, Plasmodiuim yoelli XL was attacked 63 days after immunization, serum parasitism was modulated, antibody production was controlled, and the difference was controlled. P. yoelli's evaluation of this antigen is not appropriate. yoelli evaluation system

项目成果

静岡大学生物工学研究室

静冈大学生物工程实验室

Identification of secretion domain of Neospora caninum profilin

犬新孢子虫profilin分泌结构域的鉴定

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2019.11.056
• 发表时间: 2020
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Suhaimi Hamizah;Xu Jian;Kato Tatsuya;Setyo Utumo Doddy Irawan;Sekiguchi Tomofumi;Park Enoch Y.
• 通讯作者: Park Enoch Y.

Identification of effective peptide derived from WSSV-VP15 for protection of Masupenaeus japonicus against WSSV

鉴定源自 WSSV-VP15 的有效肽，以保护日本马对虾免受 WSSV 侵害

• 发表时间: 2020
• 作者: Jirayu Boonyakida、Jian Xu、Jun Satoh、Takafumi Nakanishi、Toru Mekata、Tatsuya Kato;and Enoch Y. Park
• 通讯作者: and Enoch Y. Park

Two-step purification of tag-free norovirus-like particles from silkworm larvae (Bombyx mori)

• DOI: 10.1016/j.pep.2021.106010
• 发表时间: 2021-11-03
• 期刊: PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION
• 影响因子: 1.6
• 作者: Boonyakida，Jirayu;Utomo，Doddy Irawan Setyo;Park，Enoch Y.
• 通讯作者: Park，Enoch Y.

Preparation of divalent antigen-displaying enveloped virus-like particles using a single recombinant Bombyx mori nucleopolyhedrovirus bacmid in silkworms

• DOI: 10.1016/j.jbiotec.2020.08.002
• 发表时间: 2020-11-10
• 期刊: JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
• 影响因子: 4.1
• 作者: Kato，Tatsuya;Machida，Yuki;Park，Enoch Y.
• 通讯作者: Park，Enoch Y.