Elucidation of the mechanism of DNA vaccine efficacy in fish

阐明 DNA 疫苗对鱼类的功效机制

• 批准号: 20H03081
• 负责人: 高野 倫一
• 金额: $ 9.9万
• 依托单位: Fisheries Research and Education Agency
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03081/
• 关键词: DNAワクチ; 魚類; ギンブナ; 細胞性免疫; ラブドウイルス; DNAワクチン; 受動免疫; 免疫; クローンギンブナ

本研究では、ギンブナに感染するラブドウイルスのCarp Haematopoietic Necrosis Virus（CHNV）をモデルとして、魚類でDNAワクチンが有効性を発揮するためのメカニズムを解明する。令和3年度までに、CHNVの全ゲノム配列を決定した。CHNVゲノム配列から予測したグリコ（G）プロテイン遺伝子またはヌクレオキャプシド(N)プロテイン遺伝子を挿入したDNAワクチン（順に、pcDNA-CHNVgまたはpcDNA-CHNVn)を作製し、それぞれをDNAワクチンとしてギンブナ筋肉に注射し免疫した。次いで、CHNVを腹腔内に注射し攻撃したところ、pCDNA-CHNVgで免疫した場合にはCHNV感染に対する防御効果が認められた。令和4年度は、DNAワクチンで免疫したギンブナの白血球を移植することで受動免疫が成立するかを確認した。pcDNA-CHNVgまたは対照のpcDNA6 V5-His A（空ベクター)を繰返し4回接種したギンブナを用意し、それぞれのDNAワクチンを接種した個体の腎臓白血球を別々に回収した。次いで、抗ギンブナCD8αモノクローナル抗体を用いたMagnetic-activated cell sorting (MACS)でCD8α陽性白血球（CD8+cells)とそれ以外の白血球（CD8-cells)を分画した。全白血球、CD8+ cellsまたはCD8- cellsをnaiveなOB1系統ギンブナに腹腔内注射で移植し、24時間後に致死量のCHNVウイルスを腹腔内接種した。その結果、pcDNA-CHNVg接種魚の全白血球またはCD8- cellsを移植した場合には累積死亡率が顕著に低下した。興味深いことに、pcDNA-CHNVgと空ベクター接種の何れにおいても、細胞傷害性T細胞が含まれると考えられるCD8+ cellsを移植した場合には60%以上の累積死亡率が観察された。このことから、pcDNA-CHNVgを接種したギンブナのCD8- cellsがCHNV感染防除に重要な役割を果たし、受動免疫を成立させると考えられた。

This study is intended to clarify the role of Carp Haematopoetic Necrosis Virus (CHNV) in the development of fish DNA. In the third year, CHNV decided on the allocation of all its products. CHNV must be able to control and control the DNA sequence of the predicted DNA sequence (G) and the predicted DNA sequence (N). In the second case, CHNV was injected intraperitoneally into the abdomen, and pCDNA-CHNV was injected intraperitoneally into the abdomen. In 2004, the establishment of immune system was confirmed. pcDNA-CHNVg was used to isolate the kidney leukocytes of the individuals inoculated with pcDNA6 V5-His A (empty). Second, anti-CD8 α anti-CD8 anti-CD8 anti-CD8 Whole white blood cells, CD8 + cells and CD8- cells are injected intraperitoneally into the uterus, and lethal doses of CHNV cells are injected intraperitoneally 24 hours later. As a result, the cumulative mortality of pcDNA-CHNVg inoculated fish was significantly lower than that of CD8- cells transplanted. The cumulative mortality rate of CD8 + cells transplanted into infected cells was more than 60%. PCDNA-CHNVg vaccination is important for CHNV infection prevention and immune response.

项目成果

フナ造血器壊死ウイルス（CHNV）に対するDNAワクチン

鲫鱼造血坏死病毒 (CHNV) DNA 疫苗

• 发表时间: 2022
• 作者: Aikawa Takuya;Maehara Noritoshi;Ichihara Yu;Masuya Hayato;Nakamura Katsunori;Anbutsu Hisashi;高野倫一・松浦雄太・梅田剛佑・吉野友晃・中西照幸・松山知正・杣本智軌
• 通讯作者: 高野倫一・松浦雄太・梅田剛佑・吉野友晃・中西照幸・松山知正・杣本智軌

Differential expression of two CD83 isotypes in monocyte-macrophage lineage in ginbuna crucian carp

银鲫单核巨噬细胞谱系中两种CD83同种型的差异表达

• 发表时间: 2023
• 作者: Thu Trang Tran;Takahiro Nagasawa;Miki Nakao;Tomonori Somamoto
• 通讯作者: Tomonori Somamoto

粘膜組織を介した抗原投与法の違いによるギンブナ抗体産生応答の比較

不同抗原给药方法通过粘膜组织产生银杏抗体的反应比较

• 发表时间: 2021
• 作者: Casalme Loida O.;Katayama Keisuke;Hayakawa Yoshiki;Nakamura Kensuke;Yamauchi Arisa;Nogata Yasuyuki;Yoshimura Erina;Matsuda Fuyuhiko;Umezawa Taiki;阪中晴子・長澤貴宏・中尾実樹・杣本智軌
• 通讯作者: 阪中晴子・長澤貴宏・中尾実樹・杣本智軌

ブリ類のインターフェロンγ（IFNγ）を定量する方法の開発

开发黄尾鱼中干扰素 γ (IFNγ) 的定量方法

• 发表时间: 2021
• 作者: 松浦 雄太;松山 知正;高野 倫一;中易 千早
• 通讯作者: 中易 千早

魚類CD8+T細胞のMHC非依存的な細胞媒介性細胞傷害における寄生原虫認識受容体の探索

在鱼类 CD8+ T 细胞的 MHC 独立细胞介导的细胞毒性中寻找寄生虫识别受体

• 发表时间: 2021
• 作者: Motohiro Akashi;Ichiro Fujihara;Masaharu Takemura;Mitsuru Furusawa.;大垣拓也，阿利拓夢，山本 俊，田中未來，飯田洋輝，小澤芳樹，阿部正明，佐藤寛泰，太田英輔，松井康哲，池田 浩;助田将樹,長澤貴宏,中尾実樹,杣本智軌
• 通讯作者: 助田将樹,長澤貴宏,中尾実樹,杣本智軌