Elucidation of the mechanism of DNA vaccine efficacy in fish

阐明 DNA 疫苗对鱼类的功效机制

• 批准号: 20H03081
• 负责人: 高野 倫一
• 金额: $ 9.9万
• 依托单位: Fisheries Research and Education Agency
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03081/
• 关键词: DNAワクチ; 魚類; ギンブナ; 細胞性免疫; ラブドウイルス; DNAワクチン; 受動免疫; 免疫; クローンギンブナ

本研究では、ギンブナに感染するラブドウイルスのCarp Haematopoietic Necrosis Virus（CHNV）をモデルとして、魚類でDNAワクチンが有効性を発揮するためのメカニズムを解明する。令和3年度までに、CHNVの全ゲノム配列を決定した。CHNVゲノム配列から予測したグリコ（G）プロテイン遺伝子またはヌクレオキャプシド(N)プロテイン遺伝子を挿入したDNAワクチン（順に、pcDNA-CHNVgまたはpcDNA-CHNVn)を作製し、それぞれをDNAワクチンとしてギンブナ筋肉に注射し免疫した。次いで、CHNVを腹腔内に注射し攻撃したところ、pCDNA-CHNVgで免疫した場合にはCHNV感染に対する防御効果が認められた。令和4年度は、DNAワクチンで免疫したギンブナの白血球を移植することで受動免疫が成立するかを確認した。pcDNA-CHNVgまたは対照のpcDNA6 V5-His A（空ベクター)を繰返し4回接種したギンブナを用意し、それぞれのDNAワクチンを接種した個体の腎臓白血球を別々に回収した。次いで、抗ギンブナCD8αモノクローナル抗体を用いたMagnetic-activated cell sorting (MACS)でCD8α陽性白血球（CD8+cells)とそれ以外の白血球（CD8-cells)を分画した。全白血球、CD8+ cellsまたはCD8- cellsをnaiveなOB1系統ギンブナに腹腔内注射で移植し、24時間後に致死量のCHNVウイルスを腹腔内接種した。その結果、pcDNA-CHNVg接種魚の全白血球またはCD8- cellsを移植した場合には累積死亡率が顕著に低下した。興味深いことに、pcDNA-CHNVgと空ベクター接種の何れにおいても、細胞傷害性T細胞が含まれると考えられるCD8+ cellsを移植した場合には60%以上の累積死亡率が観察された。このことから、pcDNA-CHNVgを接種したギンブナのCD8- cellsがCHNV感染防除に重要な役割を果たし、受動免疫を成立させると考えられた。

在这项研究中，我们将使用鲤鱼造血性坏死病毒（CHNV）阐明DNA疫苗在鱼类中的有效性，这是一种感染了刺刺馆的黄ag虫。到2021财政年度，已经确定了CHNV的整个基因组序列。制备了含有Glyco（G）蛋白基因或核素蛋白（N）蛋白基因的DNA疫苗（顺序，PCDNA-CHNVG或PCDNA-CHNVN），准备了CHNV基因组序列，并注入每种基因，并将每个基因注入Ginbuna肌肉中，作为DNA疫苗和免疫。接下来，将CHNV注入腹膜腔并受到攻击，当用pcDNA-CHNVG免疫时，发现它具有针对CHNV感染的保护作用。在2022年，我们证实了是否可以通过从Ginbuna中移植白细胞来实现被动免疫，该细胞已通过DNA疫苗免疫。用pcDNA-CHNVG或对照pcDNA6 V5-HIS A（空载体）反复地制备了Ginbuna，并分别收集了用每种DNA疫苗接种的个体的肾白细胞。接下来，使用抗ginbunaCD8α单氯隆抗体，通过磁性细胞分选（MAC）分口CD8α阳性白细胞（CD8+细胞）和其他白细胞（CD8细胞）。通过腹膜内注射将总白细胞，CD8+细胞或CD8-细胞植入幼稚的OB1菌株Ginbuna中，24小时后，将致命的CHNV病毒剂量接种了腹膜内。结果，当将总白细胞或CD8细胞植入PCDNA-CHNVG鱼中时，累积死亡率显着降低。有趣的是，当认为含有细胞毒性T细胞的CD8+细胞被植入PCDNA-CHNVG和空载体接种时，累积死亡率≥60％。这表明来自Ginbuna的CD8细胞接种了PCDNA-CHNVG，在控制CHNV感染并导致被动免疫方面起着重要作用。

项目成果

フナ造血器壊死ウイルス（CHNV）に対するDNAワクチン

鲫鱼造血坏死病毒 (CHNV) DNA 疫苗

• 发表时间: 2022
• 作者: Aikawa Takuya;Maehara Noritoshi;Ichihara Yu;Masuya Hayato;Nakamura Katsunori;Anbutsu Hisashi;高野倫一・松浦雄太・梅田剛佑・吉野友晃・中西照幸・松山知正・杣本智軌
• 通讯作者: 高野倫一・松浦雄太・梅田剛佑・吉野友晃・中西照幸・松山知正・杣本智軌

Differential expression of two CD83 isotypes in monocyte-macrophage lineage in ginbuna crucian carp

银鲫单核巨噬细胞谱系中两种CD83同种型的差异表达

• 发表时间: 2023
• 作者: Thu Trang Tran;Takahiro Nagasawa;Miki Nakao;Tomonori Somamoto
• 通讯作者: Tomonori Somamoto

粘膜組織を介した抗原投与法の違いによるギンブナ抗体産生応答の比較

不同抗原给药方法通过粘膜组织产生银杏抗体的反应比较

• 发表时间: 2021
• 作者: Casalme Loida O.;Katayama Keisuke;Hayakawa Yoshiki;Nakamura Kensuke;Yamauchi Arisa;Nogata Yasuyuki;Yoshimura Erina;Matsuda Fuyuhiko;Umezawa Taiki;阪中晴子・長澤貴宏・中尾実樹・杣本智軌
• 通讯作者: 阪中晴子・長澤貴宏・中尾実樹・杣本智軌

ブリ類のインターフェロンγ（IFNγ）を定量する方法の開発

开发黄尾鱼中干扰素 γ (IFNγ) 的定量方法

• 发表时间: 2021
• 作者: 松浦 雄太;松山 知正;高野 倫一;中易 千早
• 通讯作者: 中易 千早

魚類CD8+T細胞のMHC非依存的な細胞媒介性細胞傷害における寄生原虫認識受容体の探索

在鱼类 CD8+ T 细胞的 MHC 独立细胞介导的细胞毒性中寻找寄生虫识别受体

• 发表时间: 2021
• 作者: Motohiro Akashi;Ichiro Fujihara;Masaharu Takemura;Mitsuru Furusawa.;大垣拓也，阿利拓夢，山本 俊，田中未來，飯田洋輝，小澤芳樹，阿部正明，佐藤寛泰，太田英輔，松井康哲，池田 浩;助田将樹,長澤貴宏,中尾実樹,杣本智軌
• 通讯作者: 助田将樹,長澤貴宏,中尾実樹,杣本智軌