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ファージの単離を経ない次世代ファージバイオロジクスの創出

无需噬菌体分离即可创建下一代噬菌体生物制剂

基本信息

批准号：
20H03723
负责人：
安藤弘樹
金额：
$ 11.48万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度、大幅な遅れが生じたものの陽性対照となる遺伝子Aを準備することができた。これにより、塩基配列の抽出、コドン最適化、合成、クローニング、発現、標的細菌に対する殺菌性評価、を一つのプラットホーム上で実施できるようになった。遺伝子情報が集められたデータベースから、標的細菌に活性を示す可能性があり、論文等で機能解析が行われていない遺伝子を約200種類抽出した。大腸菌内での効率的な発現を実現するために、遺伝子Aに対して行ったのと同様の方法でコドンを最適化して合成した。この際、5'端と3'端にin vitro DNA assembly用の共通配列を付加し、次のクローニング作業をハイスループット化した。発現ベクターへのクローニング後、プラスミドを抽出し、各遺伝子の配列を確認した。変異が生じていたものについてはクローニングからやり直した。その後、大腸菌内で遺伝子発現を誘導し、超音波処理により菌体を破壊、粗抽出物を得た。これを標的細菌上に滴下することで各遺伝子産物の溶菌活性・抗菌活性の有無を判定した。複数の遺伝子産物が溶菌活性・抗菌活性を示した。

Yesterday, A large number of positive reactions were produced, and a large number of positive reactions were prepared. This is the first time that a virus has been detected in a human body. About 200 kinds of genes were extracted from the gene information collection, the activity of the target bacteria, and the function analysis of the gene. The production of E. coli and the synthesis of E. coli are optimized. At the same time, the common alignment of 5'and 3' in vitro DNA assembly was increased, and the secondary DNA assembly was improved. After the discovery of the information, the selection process is extracted, and the arrangement of each gene is confirmed. The difference between the two is that they are different. After treatment, the production of E. coli was induced, and the bacteria and crude extracts were obtained by ultrasonic treatment. The presence or absence of lytic activity and antibacterial activity of each gene product was determined when the target bacteria were dripped. A number of genetic products were shown to have bacteriolytic and antibacterial activities.