Cdk6による骨格幹細胞G0/G1期制御機構の解明と骨再生医療に向けた基礎的検討

阐明Cdk6对骨骼干细胞G0/G1期的调控机制及骨再生医学基础研究

• 批准号: 20H03884
• 负责人: 小笠原 徹
• 金额: $ 11.4万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03884/
• 关键词: 骨格幹細胞; 細胞周期; G0/G1期; 骨軟骨代謝学; 再生医療

骨代謝メカニズムの解明は口腔外科学分野において非常に重要な課題である。本研究では、研究代表者のこれまでの研究成果の発展形として、細胞周期のG0/G1期に着目して、骨格に存在する組織幹細胞（骨格幹細胞）の制御機構を明らかとすることによって、骨代謝制御メカニズムのさらなる理解を深めるとともに、その結果を骨再生医療分野における臨床応用につなげるための基礎的検討を行う。2021年度は以下の項目を検討した。【Cdk4転写因子群のゲノム結合部位同定のための条件検討】野生型マウス由来の骨髄間葉系幹細胞に対して、①血清除去によって細胞を強制的にG0期に移行させたサンプル、②G0期の細胞を血清刺激によってG1期へ導入させたサンプル、を調製し、そのサンプルと抗Cdk4抗体とを利用したChIP-seqを試みた。本項目を実施するための最初の実験として、抗Cdk4抗体を用いた免疫沈降を行ったが、ChIP-seqを実施するために必要な量のCdk4複合体を得ることに難航したため、プロトコールの修正を行い、ChIP-seqを可能とする条件を検討した。【Cdk6転写因子群とCdk4転写因子群のゲノム結合部位の比較】前年度までに、Cdk6と複合体を形成する転写因子群（Cdk6結合転写因子群）がゲノムに結合する箇所を網羅的な解析によって同定していたが、この知見と、in silico解析によってCdk4が結合し得る箇所とを比較検討することにより、抗Cdk4抗体を利用したChIP-seqによって得られる結果を迅速に統合解析可能とする準備を進めた。

Bone metabolism is a very important topic in oral surgery. This study aims to explore the development of research results, the significance of G0/G1 phase of cell cycle, the existence of bone stem cells (bone stem cells), the regulatory mechanism of bone metabolism, the understanding of bone metabolic regulation, and the results of bone regeneration medicine. In 2021, the following projects were reviewed. [Study on the condition of Cdk4 gene binding site identification] Wild-type stem cells derived from bone marrow mesenchymal stem cells;(1) Serum removal;(2) Cell stress;(3) Serum stimulation;(4) Introduction;(5) Anti-Cdk4 antibody; and (6) ChIP-seq. This project was carried out in the first place, and the conditions for the use of anti-Cdk4 antibodies, immunosedimentation, and ChIP-seq were discussed. [Comparison of binding sites between Cdk6 and Cdk4 writing factor groups] Writing factor groups for the formation of Cdk6 and Cdk6 complexes in previous years (Cdk6 binding factor group) For the analysis of Cdk4 binding sites in silico analysis, comparison of Cdk4 binding sites in silico analysis,

项目成果

ホメオボックス転写因子Nanogは間葉系細胞の骨軟骨分化において重要である.

同源盒转录因子 Nanog 在间充质细胞的骨软骨分化中很重要。

• 发表时间: 2020
• 作者: Mizutani K;Guo X;Shioya A;Zhang J;Zheng J;Kurose N;Ishibashi H;Motono N;Uramoto H;Yamada S.;小笠原 徹
• 通讯作者: 小笠原 徹

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