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細胞間コミュニケーション分子『エクソソーム』中の代謝物質の解明

阐明细胞间通讯分子“外泌体”中的代谢物

基本信息

批准号：
20J12816
负责人：
早坂亮祐
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、エクソソームのメタボローム解析法を構築し、エクソソームの代謝物質の特徴を明らかにし、エクソソームを介したがんの進展メカニズムの一端の解明を目指した。分取HPLCとサイズ排除クロマトグラフィーを組み合わせて、半自動的にエクソソームを回収可能なシステムを構築した。大腸がん細胞株の培養上清から構築したサイズ排除クロマトグラフィー法と超遠心法でエクソソームを回収し、液体クロマトグラフィー/質量分析法、キャピラリーイオンクロマトグラフィー/質量分析法、超臨界流体クロマトグラフィー/質量分析法を用いて、同一サンプルから親水性代謝物質と脂質の一斉分析を行った。その結果、回収方法によって、代謝物質プロファイルが異なっており、サイズ排除クロマトグラフィー法において、エクソソーム特有の代謝物質プロファイルが顕著に観察された。また、構築した手法を用いて、がんの発がんに関与する代謝物質であるオンコメタボライトの1つを多量に産生する変異株と野生株由来のエクソソームを回収し、メタボローム解析した。オンコメタボライト多量産生株は多くのエクソソームを放出していた。エクソソーム中でそのオンコメタボライトが含有し、代謝物質プロファイルも大きく変化することが観察された。エクソソームががんの悪性化に関与する代謝物質を含んでいる可能性が示唆された。

In this study, we aimed to construct a new method for the analysis of metabolites in a complex system, and to clarify the characteristics of metabolites in a complex system. Separation of HPLC and its possible components Construction of culture supernatant of large intestine cell line by elimination method, ultra-remote method, recovery method, liquid analysis method, mass analysis method, supercritical fluid analysis method, analysis method of hydrophilic metabolites and lipids The results, recovery methods, metabolites, and the elimination of metabolites are the same. The method of construction is used in the analysis of metabolites in different quantities, such as mutant and wild strains. The number of plants produced in the first place is more than the number of plants produced in the second place. The content of metabolites in the medium and the medium of the drug was investigated. The possibility of metabolic substances being included in the system is indicated.