血中 HRG を指標とするウマ全身性炎症反応症候群の病態解析

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1) HRG 定量系の確立: 前年度に作成したウサギ抗ウマ HRG ポリクローナル抗体を使用して競合的 ELISA による血漿中ウマ HRG 測定系を作成した。この系を用いてサラブレッド血漿中 HRG 濃度を調べたところ、血漿中ウマ HRG は約 300 μg/ml で含まれ、ヒトやマウスの報告と比較して濃度が高いことがわかった。今後、この系を利用することによって、炎症性疾患と血漿中ウマ HRG 濃度動態の関連性解明が期待される。2) 組換え変異体 HRG の作成: 蛍光色素とウマ HRG を共発現するよう各細胞株に遺伝子導入を行い、セルソーターを使用して遺伝子導入細胞をセレクションした。これにより、野生型および変異型ウマ HRG 定常発現性のウマ線維芽細胞株 (NBL-6) とチャイニーズハムスター卵巣細胞 (CHO細胞) の作製に成功した。これら細胞の培養上清を使用して、組換えタンパク質発現をウェスタンブロット法によって確認した。今後、作製した組換えウマ HRG の機能比較を行うことによって、野生型と変異型 HRG の機能的差異の解明が期待される。3) ウマ HRG 遺伝子多型の同定: 960頭のサラブレッド血液ゲノム由来 DNA を使用して ジェノタイピングを実施したところ、HRR ドメインに 2 種類の部分欠失が見つかり、これら欠失を含む 5 種類の遺伝子型が存在することが判明した。各遺伝子型はいずれも 1 % 以上含まれることから、ウマ HRG 遺伝子多型は 5 種類の遺伝子型によって構成されることがわかった。また、各遺伝子型の血漿サンプルを使用して ELISA 法により HRG 濃度を測定したところ、遺伝子型間で濃度差は確認されなかった。今後、野生型および変異型ウマ HRG の機能比較を行うことによって、発見されたウマ HRG 遺伝子多型の意義解明が期待される。