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マウス原腸胚の三胚葉形成において遺伝子発現を制御するクロマチン構造変化の解明

阐明小鼠原肠胚三个胚层形成过程中控制基因表达的染色质结构变化

基本信息

批准号：
20J21746
负责人：
鈴木颯
金额：
$ 1.98万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、マウス原腸胚における三胚葉形成について、クロマチン構造という観点から内胚葉、外胚葉、中胚葉それぞれで特異的なオープンクロマチン領域を同定することを目的とし、3つの課題に取り組んでいる。以下に令和4年度の研究実施状況を示す。１．三胚葉形成において各胚葉で特異的なオープンクロマチン領域の探索：前年度に引き続き、各々の胚葉を蛍光で識別可能なMIERUマウス(内胚葉マーカーSox17遺伝子にEGFP遺伝子が、外胚葉マーカーOtx2遺伝子にtdTomato遺伝子が、中胚葉マーカーT遺伝子にTagBFP遺伝子がそれぞれノックインされている）ES細胞から三胚葉可視化キメラマウス原腸胚を作製・発達させ、FACSにて胚葉特異的な細胞集団を分取した。上記で分取した細胞に対して、ATAC-seqのライブラリー作製の条件を検討した。しかし、ライブラリー作製の成功には至らなかった。２．各胚葉の特異的オープンクロマチン領域と遺伝子発現との相関の解析： 1.と同様に、EGFPタンパク質を利用したFACSにて分取した細胞で、三胚葉それぞれのマーカー遺伝子の発現を調べた。その結果、外胚葉および中胚葉のマーカー遺伝子の発現は内胚葉マーカー遺伝子よりも低い、あるいは発現が見られなかった。３．オープンクロマチン領域の破壊による胚葉形成異常の確認：クロマチン構造の形成に機能するYbx1遺伝子を破壊したマウス原腸胚にてクロマチン構造解析し、野生型と比較することで、各胚葉形成に重要なオープンクロマチン領域を絞り込めると考えた。MIERUマウスES細胞にCRISPR-Cas9を導入してYbx1-KO ES細胞を作製し、2.と同様にキメラ胚の作製・発達させてEGFPタンパク質を利用したFACSにて細胞を分取した。その後、次世代シーケンサーを用いたデータ取得し遺伝子発現を解析した結果、Ybx1のKOが確認できた。

The purpose of this study is to determine the target of the three embryos in the field of endoderm, ectoderm, mesoderm, endoderm and mesoderm. The following order and the 4-year study show the status quo. 1. The three embryos form the special characteristics of each embryo in the field of exploration: in the previous year, the introduction of the previous year, the light of each embryo, the possibility of MIERU, the endoderm, the Otx2, the Otx2, the tdTomato, Mesoderm

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

三胚葉形成を可視化するトリプルノックインレポーターシステムの開発

开发三重敲入报告系统以可视化三叶细胞形成

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
鈴木颯;村田知弥;大徳陽子;濱田優子;谷本陽子;水野聖哉;杉山文博
通讯作者：
杉山文博

A novel creation of reporter mouse model for visualizing germ layer formation

一种新颖的报告小鼠模型，用于可视化胚层形成

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hayate Suzuki;Tra Thi Huong Dinh;Yoko Daitoku;Kanako Kato;Yoko Tanimoto;Kazuya Murata;Seiya Mizuno;Fumihiro Sugiyama
通讯作者：
Fumihiro Sugiyama

三胚葉形成の評価に有用なES細胞の作製

可用于评估三叶细胞形成的 ES 细胞的产生