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新奇なオンゲル共培養法を用いた脳スフェロイドへの血管網構造構築原理の探索

探索使用新型凝胶共培养方法在脑球体中构建血管网络结构的原理

基本信息

批准号：
20K05236
负责人：
森英樹
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka Metropolitan University (2022)Osaka Prefecture University (2020-2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、脳オルガノイド内に血管網を構築する方法の糸口を見つけるために、ハイドロゲル上で脳スフェロイド（ニューロスフェア、脳オルガノイド）と血管形成細胞の共培養・浸潤アッセイ系を作製し、脳スフェロイドへの血管形成細胞の浸潤および血管網構造形成条件を探索することを目的としている。3年目は足場材料となるコラーゲンゲルへのUV照射の有無によって血管内皮細胞の形態が異なるという昨年度見つけた現象について、更に脳スフェロイドへの血管内皮細胞の浸潤を調べるための培養系として、ニューロスフェアや脳オルガノイドのゲルへの接着固定条件と共培養条件について検討した。培養細胞の経時的な顕微鏡観察や遺伝子発現解析によって、血管内皮細胞におけるタイトジャンクション形成や線状の血管内皮細胞の接着にはUV照射を施さないコラーゲンゲルの方が良い結果を得たが、脳オルガノイドとの共培養に適した足場条件を得るには、オルガノイドと血管内皮細胞を組み合わせた実験系による更なる検討が必要である。ランカスターらの方法でヒトiPS細胞から誘導した脳オルガノイドはコラーゲンゲルに接着したが、その後の培養経過に伴い細胞がゲル上を移動し、元々のオルガノイド内部の構造が変化してしまった。培養によって誘導する細胞塊内部の脳オルガノイドの状態は非常にヘテロで、解析するためには多くの脳オルガノイドを使って条件を検討しなければならない。脳オルガノイドの調製に時間を要し、十分な共培養血管浸潤条件の検討ができていないので、次年度に延長し更なる検討を行う予定である。コラーゲンゲル上における血管内皮細胞の浸潤や形態変化の解析結果に関しては一部を学会にて発表した。

The purpose of this study is to establish a method for the detection of blood vessels in the internal vascular network. in this study, the methods of the internal vascular network were used in this study. in this study, we used the methods of the internal vascular network in this study. To explore the conditions for the formation of blood vessels, to explore the conditions for the formation of blood vessels. In the past 3 years, the materials of the foot field have been irradiated with UV. The shape of the vascular endothelium cell has been observed in the past year. Let's go on to fix the condition, the co-culture condition, the co-culture condition. During the incubation period, the microstructures of the cells were observed. The results showed that the vascular endothelial cells were isolated, the vascular endothelial cells were isolated, the vascular endothelial cells were formed, and then the UV irradiation was performed. The results showed that the results showed that the results were satisfactory, and the conditions of the co-culture were satisfactory. The vascular endothelial cells are used to make sure that the vascular endothelial cells are necessary. In this way, the iPS system is used to make sure that the computer system is used. After that, the computer is transferred to the computer through the companion cell computer, and the computer system is created in the system. In order to make sure that the conditions are different, the status of the internal system is very different, so that the conditions can be changed. It is necessary to determine the time limit and ten percent of the total vascular immersion conditions, and the schedule of the next year will be extended to the next year. In this study, the vascular endothelial cells were immersed into the vascular endothelial cells and the results of the analysis were compared.