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高リスク型ゲノム構造によるゲノム蛋白群の動的集合と機能制御

高风险基因组结构对基因组蛋白的动态组装和功能控制

基本信息

批准号：
20K06560
负责人：
川上広宣
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo University of Science, Yamaguchi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、前任での研究の論文化に貢献するとともに（改稿版投稿中）。過去に報告した一本鎖DNA上での出芽酵母ORCの機能構造分化と制御(Kawakami et al., 2019, Genes Cells)をベースとして、更に発展させた。ORCは複製起点DNA二重鎖らせんの認識に必須な蛋白複合体であり、我々が最大サブユニットOrc1内に見いだしたモチーフeukaryotic origin sensor (EOS)は、基質DNAが二重らせんか一本鎖かによってORCの機能構造分化をもたらす(Kawakami et al., 2015, Sci. Rep.; Kawakami et al., 2019)。細胞内には一本鎖DNAを含め、二重らせんよりも高リスクとされる種々の非典型DNA構造が存在する。ORCの真正細菌オーソログDnaAにおいては、一本鎖DNAとの結合能の重要性が実験的に裏付けられている(Ozaki, Kawakami et al., 2008; Sakiyama, Kawakami et al., 2013)。一方、ORCの非典型DNA構造による制御の細胞内における役割や関与する染色体領域についての実験的証拠がない。そこで本年度は、これらの実験的証拠を得ることを志向して、出芽酵母細胞内におけるORCの特異的制御因子を重点的に探索することとした。昨年度開発した「ORC1機能を遺伝学的に亢進させるゲノム領域を簡便にスクリーニングするシステム」を用いて探索規模を拡大させたところ、従来は見逃していたスクリーニングの特異性の問題が判明した。更に改良を行い、スクリーニングの特異性を従来よりも上げることに成功した。併行して、異なる原理によって制御因子をスクリーニングするシステムの開発にも着手し、ORC1機能の制御に関わるゲノムクローンを見いだすことに成功した。今後、スクリーニングの規模を拡大しつつ、個別解析を進めることで、ORCと非典型DNA構造との連携に関わる証拠を得たい。併行して、昨年度の実績の論文発表にも着手している。

This year's and previous studies on culture and culture will be presented (in the revised version). In the past, there has been a report that the ORC machine of Saccharomyces cerevisiae on DNA can be used to control the differentiation of yeast (Kawakami et al., 2019, Genes Cells). The starting point of ORC replication is DNA double replication. The knowledge must be based on the protein complex, the maximum DNA sequence in Orc1, the sequence eukaryotic origin sensor (EOS), and the base DNA copy. One copy of the ORC machine can generate differentiating DNA fragments (Kawakami et al., 2015, Sci. Rep.; Kawakami et al., 2019). There are several kinds of atypical DNA products in the cell, such as those of the non-typical DNA products of the first and second copies. ORC real bacteria and DnaA drugs, a book that combines DNA information with information about importance (Ozaki, Kawakami et al., 2008; Sakiyama, Kawakami et al., 2013). On the one hand, ORC's atypical DNA system controls the production of intracellular and chromosomal pathogens. The key points of this year's research, such as the determination of ambition and the controlling factors of intracellular ORC in Saccharomyces cerevisiae, are the key points of exploration. Since the beginning of the year last year, there has been an increase in the field of information technology in the field of ORC1. It is necessary to use the exploration model to improve the safety and safety of medical personnel. To improve the quality of the line, to improve the quality of the line, to improve the performance, to improve the success. In principle, the control factor was used to control the success of the operation. The ORC1 machine was able to make sure that the operation was successful. In the future, the standard size of the system will be greatly improved, and the ORC atypical DNA system will be successfully linked with each other. In the last year, the list of documents for the first time will be completed.