iPS発がんモデルとゲノム編集スクリーニングによる神経芽腫エピゲノム療法開発

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I-1.神経芽腫におけるヒストン修飾コードのChIPseq解析とメチローム解析神経芽腫細胞株を用いて、ChIPseq解析：MYCN, H3K4me3, H3K27AceをMACS2ソフトウェアで解析した。TSS周囲10kbのヒートマップ解析で、これらの３つの結合部位は高頻度に一致していることを明らかにした。H3K4me3結合の13000部位の約6割7000遺伝子にMYCN結合が認められ、神経芽腫においてMYCNが転写のマスターレギュレーターであることを示唆していた。この7000遺伝子の関与する経路をDAVIDソフトウェアを用いて解析すると、転写、翻訳、細胞周期に関る経路の存在が認められた。次に神経芽腫細胞株を用いて、ChIPseq解析：H3K27me3とポリコームPRC2のEZH2を行った。このピークコールはDANPOS2ソフトウェアを用いて行い、閾値設定をlog10q value>50にて解析した。結果はH3K27me3とポリコームPRC2のEZH2で共在遺伝子が高頻度に認められた。同NB細胞にてイルミナInfiniumアレイを用いたメチローム解析を行った。PRC2分子EZH2の低分子阻害剤EPZ-6437を用いたところ、ゲノムメチル化に与える影響は少ないことが判明した。さらにDNMT阻害剤をEZH2iと併用すると、相乗的な細胞増殖抑制効果が認められた。I-2. MYCN導入NCC形質転換クローンのトランスクリプトーム解析アジレントマイクロアレイによるトランスクリプトーム解析を野生型iPS:3例とp53変異患者由来iPS1例について行った。また同じく野生型iPSから誘導したNCC:3例とp53変異患者由来iPSから誘導したNCC1例のトランスクリプトーム解析を行った。さらに、これらを免疫不全マウスの副腎周囲脂肪織に移植し、得られた腫瘍のトランスクリプトーム解析を行った。