メタゲノム解析による食品衛生指標菌の選抜と汚染源推定技術への応用

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究では、腐敗食品の指標となる細菌種の選抜とその簡易検出システムの構築を目的としている。昨年度までの研究で、腐敗した食肉や洋菓子の指標菌を選抜した。そして、イムノクロマトアッセイによって洋菓子の腐敗度を評価できることが分かった。本年度は、細菌全般を検出するため、ポリリジンを用いた試験紙を構築し、それを用いたアッセイ(polylysine-based lateral flow assay: PLFA)の検出感度やスペクトルを調べた。腐敗した食品から検出される事例が多い腸内細菌科属の細菌、乳酸菌、Pseudomonas属の細菌、 Bacillus属の細菌等34属88種90株すべてをPLFAによって検出できた。≧6 log10 (cfu/test)の菌濃度のときに陽性となった。合計36種類の新鮮な食品(レタス、千切りキャベツ、細切りダイコン、もやし、食肉、洋菓子)とそれに相当する36種類の腐敗した食品を3h、6h、9h培養し、各々何時間培養したときにPLFAで検出できるか調べた。すべてのサンプルにおいて、腐敗食品は新鮮食品よりも短い培養時間でPLFA陽性となった。そして、①0hで陽性の場合：>8.1 log10(cfu/g)、②3hで陽性の場合：>6.8 log10(cfu/g)、③6hで陽性の場合：>5.1 log10(cfu/g)、④9hで陽性の場合：>4.4 log10(cfu/g)、⑤9hでも陰性の場合：<4.4log10(cfu/g)と推測した場合、正答率96%(69/72)の確率で培養前の食品の細菌汚染の程度を予測できることが分かった。PLFA陽性となるまでの時間とlog10食品のinitial菌数(cfu/g)の関連を調べたところ、回帰直線の信頼係数は0.9888を示した。前処理をふくめたPLFAの試験時間は約30分であった。