ゼブラフィッシュ変異体を用いた精原細胞の成熟、減数分裂開始を制御する新規因子同定

精子形成では、精原細胞の増殖に伴う成熟と減数分裂のスタートは密接に関係するが、この過程を制御する機構は未解明である。本研究は、初期精原細胞が成熟できないmoto変異体、成熟を経ずに減数分裂を開始する異常を持つPM-035変異体を用いたトランスレイトーム解析(網羅的な翻訳活性解析)を通して、精原細胞の成熟・減数分裂開始を制御する分子基盤の確立、および制御因子の同定を行う。TRAP法(Translating Ribosome Affinity Purification)によるトランスレイトーム取得に必要となる、初期精原細胞でGFPタグを持つリボソームタンパク質を発現させるトランスジェニック(sox17:EGFP-rpl10a)系統の作成を最初に行い、EGFP-rpl10aが想定通りに初期精原細胞特異的に発現することを確認した。本年度は、TRAP法によって翻訳中のRNAがエンリッチされているか確認するための野生型、moto変異体、PM-035変異体精巣のRNA-seq解析を行ってトランスクリプトームを取得し、それぞれの変異体における遺伝子のRNAレベルでの発現変動パターンを確認した。これと並行して、TRAP法によるトランスレイトーム解析を進め、野生型およびmoto変異体については無事取得することができたが、PM-035変異体においてはオス個体を得ることができず、トランスレイトームの取得に至っていない。現在この問題の解決に当たっており、解決後に取得するトランスクリプトームとトランスレイトームを合わせて解析し、精原細胞の成熟・減数分裂開始を制御する分子基盤を確立する。

精子形成では、精原細胞の増殖に伴う成熟と減数分裂のスタートは密接に関係するが、この過程を制御する機構は未解明である。本研究は、初期精原細胞が成熟できないmoto変異体、成熟を経ずに減数分裂を開始する異常を持つPM-035変異体を用いたトランスレイトーム解析(網羅的な翻訳活性解析)を通して、精原細胞の成熟・減数分裂開始を制御する分子基盤の確立、および制御因子の同定を行う。TRAP法(Translating Ribosome Affinity Purification)によるトランスレイトーム取得に必要となる、初期精原細胞でGFPタグを持つリボソームタンパク質を発現させるトランスジェニック(sox17:EGFP-rpl10a)系統の作成を最初に行い、EGFP-rpl10aが想定通りに初期精原細胞特異的に発現することを確認した。本年度は、TRAP法によって翻訳中のRNAがエンリッチされているか確認するための野生型、moto変異体、PM-035変異体精巣のRNA-seq解析を行ってトランスクリプトームを取得し、それぞれの変異体における遺伝子のRNAレベルでの発現変動パターンを確認した。これと並行して、TRAP法によるトランスレイトーム解析を進め、野生型およびmoto変異体については無事取得することができたが、PM-035変異体においてはオス個体を得ることができず、トランスレイトームの取得に至っていない。現在この問題の解決に当たっており、解決後に取得するトランスクリプトームとトランスレイトームを合わせて解析し、精原細胞の成熟・減数分裂開始を制御する分子基盤を確立する。