新規雌性尿中生理活性物質の分離精製と中枢神経系内活性化部位の同定

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申請者らがこれまでに確認している「雌ラット尿中生理活性物質が雄ラット鋤鼻感覚細胞に細胞内カルシウムイオン濃度の特異的上昇を引き起こす」現象を、個体の行動的反応と中枢神経活動から検証するため、雌ラット尿に直接接触できる環境に雄ラットを導入しtて、尿に対する探索行動を観察し、その持続時間を計測した。成熟雄ラット（週齢11‐16週）を、紙製床敷を入れた行動観察用ケージ（透明アクリル製：60x45x45cm）に入れ、30分間馴化させた。このケージの四角には紙製のマウス用巣（シェファードシャックドーム型：SSP社製）を半切したものを紙テープで固定し、内部にはキムワイプを入れた。マウス用の巣は、ラットが頭部のみを内部に入れられるサイズである。馴化後、1か所の巣内キムワイプには雌ラット尿（発情前期尿、発情休止期尿）希釈液（2倍希釈）を400ul、その他3か所の巣内キムワイプには希釈に使用した生理的食塩水を400ulしみこませ、ラットの行動を30分間観察・記録した。ラットが周囲環境の匂いなどを受容して発生した神経活動のコントロール群として、尿希釈液を用いずに生理的食塩水のみを暴露した実験も行った。30分の馴化でケージ内の環境に慣れたラットは、尿希釈液を巣に注入されるとその匂いに対して反応を示し、匂いを嗅ぐ探索行動を示した。探索行動は発情前期尿（P尿）と発情休止期尿（D尿）の両者に対して顕著に発現し、その持続時間はP尿：283.12±75.33秒、D尿：247.76±79.26秒で、両者間に有意な差異は見られなかった（P尿群、D尿群ともにn=6）。行動観察後、尿暴露から1時間半経過した時点で、安楽死させて全身灌流固定し、鋤鼻器を含む吻部と脳を採材して、吻部は後固定、脱灰処理後に耐凍結処理をしてコンパウンド包埋、脳は後固定と耐凍結処理をしてコンパウンド包埋した。