新規雌性尿中生理活性物質の分離精製と中枢神経系内活性化部位の同定

女性尿液中新型生理活性物质的分离纯化及中枢神经系统激活位点的鉴定

• 批准号: 19K06943
• 负责人: 阿久津 仁美
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K06943/
• 关键词: ラット; 雌性フェロモン; 鋤鼻感覚細胞; 行動観察; 中枢神経; 最初期遺伝子; 免疫組織化学; フェロモン; 尿中生理活性物質; 脳; 雌ラットフェロモン; カルシウムイメージング; バイオアッセイ; 鋤鼻器; 免疫染色

申請者らがこれまでに確認している「雌ラット尿中生理活性物質が雄ラット鋤鼻感覚細胞に細胞内カルシウムイオン濃度の特異的上昇を引き起こす」現象を、個体の行動的反応と中枢神経活動から検証するため、雌ラット尿に直接接触できる環境に雄ラットを導入しtて、尿に対する探索行動を観察し、その持続時間を計測した。成熟雄ラット（週齢11‐16週）を、紙製床敷を入れた行動観察用ケージ（透明アクリル製：60x45x45cm）に入れ、30分間馴化させた。このケージの四角には紙製のマウス用巣（シェファードシャックドーム型：SSP社製）を半切したものを紙テープで固定し、内部にはキムワイプを入れた。マウス用の巣は、ラットが頭部のみを内部に入れられるサイズである。馴化後、1か所の巣内キムワイプには雌ラット尿（発情前期尿、発情休止期尿）希釈液（2倍希釈）を400ul、その他3か所の巣内キムワイプには希釈に使用した生理的食塩水を400ulしみこませ、ラットの行動を30分間観察・記録した。ラットが周囲環境の匂いなどを受容して発生した神経活動のコントロール群として、尿希釈液を用いずに生理的食塩水のみを暴露した実験も行った。30分の馴化でケージ内の環境に慣れたラットは、尿希釈液を巣に注入されるとその匂いに対して反応を示し、匂いを嗅ぐ探索行動を示した。探索行動は発情前期尿（P尿）と発情休止期尿（D尿）の両者に対して顕著に発現し、その持続時間はP尿：283.12±75.33秒、D尿：247.76±79.26秒で、両者間に有意な差異は見られなかった（P尿群、D尿群ともにn=6）。行動観察後、尿暴露から1時間半経過した時点で、安楽死させて全身灌流固定し、鋤鼻器を含む吻部と脳を採材して、吻部は後固定、脱灰処理後に耐凍結処理をしてコンパウンド包埋、脳は後固定と耐凍結処理をしてコンパウンド包埋した。

Applicant らがこれまでにconfirmationしている「female urinary physiologically active substance and male ラットhoe nose feeling The phenomenon of specific increase in intracellular concentration of fluorine in cells and individual cells Action reaction and central nervous system activity, direct contact with the environment, and direct contact with the female urine.男ラットを Introduction しtて, URINE に対するExploration Action を観Observation し, そのhold続时をmeasurement した. Mature males (11 to 16 weeks old), paper-made bed-clothes, tamed taming, and 30-minute domestication taming.このケージのsquare には paper のマウス巣（シェファードシャックドーム type: S Made by SP Co., Ltd.) The half-cut paper is fixed and the inner part is fixed. Use the の巣は and the ラットが head のみを internal れられるサイズである. After domestication, 1 かSOの巣内キムワイプには female ラットuria (pre-erotic urine, erosive telogen urine) Hiroshima liquid (2 times Hiroshima) 400ul, そのTA 3 The か书巣内キムワイプには西釈に uses the したphysiological food water を400ul しみこませ, and the ラットのaction を30 minutes observation and recording した.ラットが Weekly environment の匂いなどを Acceptance して発生した神経activities のコントロールGroup として, urinary water を use いずにphysiological food water のみを exposure した実験も行った. 30 minutes of acclimatization to the environment inside the house, and injection of urine and water into the environmentされるとその匂いに対して Reflection をshow し, 匂いをSNiff ぐExploration action をshow した. The exploratory action is used to determine the pre-erotic urine (P urine) and telogen urine (D urine): 283.12±7 5.33 seconds, D urine: 247.76±79.26 seconds, there is no intentional difference between the two, and the difference between them is られなかった (P urine group, D urine group, n=6). After the action observation, the urine exposure did not last for 1 hour and half, the time was passed, the whole body was perfused and fixed, the nose was fixed, the snout was removed, and the kiss was done The part is fixed after deashing, and then freeze-resistant embedding. After fixation, it is freeze-resistant embedding.