好中球細胞外小胞エクトソームの敗血症治療への応用を目指して

中性粒细胞胞外囊泡胞质体在脓毒症治疗中的应用

基本信息

批准号：
19K07562
负责人：
熊谷由美
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

研究代表者はこれまでに、マウスの骨髄から単離した好中球を生体防御ペプチドLL-37で刺激したときに放出された細胞外小胞 (Extracellular vesicles, EV) LL-37-PMN-EVは、敗血症モデルマウスの致死率を減少させること、また、特に肺において、炎症の程度が軽減していることを明らかにしてきた。現在は、LL-37-PMN-EVの生理的な標的細胞を検出するために、好中球由来のEVにCreをloadさせ、loxP-red fluorescent-loxP-green fluorescentの配列を導入したレポーターマウスを用いる系を構築している。そのために、1. 非常に困難で世界的にも殆ど成功例がない好中球の高効率なtransfectionに成功し、この好中球に由来するEVにCreを効率よくlaodする系を確立した。2. レポーターマウスの構築に用いるレポータープラスミドを作製し、培養細胞の系で機能することを確認した。3. 1. のCre-laod EVが、レポータープラスミドを有する培養細胞に取り込まれて、Cre-loxP系が作動することを確認した。4. 2.のレポータープラスミド中の、loxP-red fluorescent-loxP-green fluorescentのカセットを、Rosa26 armを持つプラスミドに組換え、ES細胞をtransfectionして組換えES細胞を樹立し、これを親マウスに移植して、遺伝子組み換えマウスを得た。しかし、目的のフラグメントの挿入が確認できなかった。現在カセットのデザインを再検討している。

该研究人员先前已经证明，当从小鼠骨髓中分离出的中性粒细胞被生物防御肽LL-37刺激时，释放出细胞外囊泡（EV）LL-37-PMN-EV，降低了屈服小鼠的杀伤率，并减少了炎症程度。目前，为了检测LL-37-PMN-EV的生理靶细胞，我们使用了一个记者小鼠构建了一个系统，其中将CRE加载在中性粒细胞衍生的EVS上，并引入了LOXP-RED荧光loxp-loxp-Green荧光序列。为此，1。我们已经成功地实现了极其困难且在世界上几乎没有成功的中性粒细胞的高效转染，并建立了一个有效地从中性粒细胞衍生出的EVS的系统。 2。制备用于构建报告基因小鼠的报告质粒并确认在培养的细胞系统中起作用。 3。已经证实，在携带报告基因质粒的培养细胞中占1。 4。在2中，在2中，LOXP-RED荧光 - 氧气荧光荧光的盒子与携带Rosa26 ARM的质粒重新组合，并将ES细胞转移以建立重组ES细胞，并将其移植到母小鼠中，以获得基因修饰的小鼠。但是，无法确认所需片段的插入。目前，我们正在重新审视盒式盒式设计。