Regulation mechanism of apoptosis-inducing death receptor localization allowing for survival in tumor cells

凋亡诱导死亡受体定位的调节机制允许肿瘤细胞存活

• 批准号: 19K07648
• 负责人: 小島 裕子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K07648/
• 关键词: 腫瘍細胞; 細胞死; DR5; 局在; 細胞膜; 核; ゴルジ装置; 細胞内輸送; タンパク質発現調節; TRAIL; DR5 localization; TRAIL-resistant tumor; Importin β1 inhibition; Agonistic antibody; Cancer therapy; 局在制御; アポトーシス; 分子標的がん治療

リガンドであるTRAIL分子と、細胞膜上で結合して細胞死を誘導するDR5タンパク質が、TRAIL耐性腫瘍細胞内では細胞膜より核に大量に局在するこれまでの実験事実を元に、DR5の局在を制御して細胞膜での発現を高めて、腫瘍細胞に対して広く細胞死誘導を可能にする機能分子を探索する目的で、バーコード化された約6,500種類のヒトタンパク質に対する約55,000種類のshRNAを含む、ヒトゲノムワイドshRNAライブラリーのモジュール#2（標的遺伝子：疾患関連遺伝子、薬剤標的遺伝子）を用いた。HEK293Tで調整した偽ウイルス粒子を、単なるTRAIL低感受性HeLa細胞株ではなく、HeLa細胞株にdeath domain欠損GFP-DR5を予め遺伝子移入した細胞に感染させてshRNAを遺伝子導入した。shRNAの選択薬剤であるDoxycyclineとGFP-DR5の選択薬剤であるG418共存下で培養、細胞膜に発現するDR5をPacific blue標識抗体で蛍光標識し、shRNAと共に遺伝子導入したTagRFP発現細胞で且つGFP発現細胞の中で、親株の細胞よりも細胞膜のDR5発現が高い細胞集団（DR5 high）をFACSでソートした。初回ソートでDR5 highはわずか0.7%だったが、5回目のソートで約50%に濃縮された。この細胞集団のコントロールとして、同様に遺伝子導入を行い、TagRFP陽性細胞で細胞膜DR5の発現が低い約80%の細胞をソートした。これらの細胞をレーザー顕微鏡で観察すると、GFP-DR5の蛍光がDR5 high の細胞では核に観察されず、ER領域と細胞膜に極めて明るく検出された。 一方、コントロール細胞は、主に核にGFP-DR5が観察され、細胞質や細胞膜の発現は弱く、ER領域の集積は認められなかった。そこで、これら２種類の細胞集団の遺伝子受託解析を依頼する。

TRAIL molecules bind to the cell membrane and induce cell death. DR5 molecules bind to the cell membrane and induce cell death. DR5 molecules bind to the cell membrane and induce cell death. DR5 molecules bind to the cell membrane and induce cell death. 500 species of shRNA are targeted to approximately 55,000 species of shRNA, including shRNA, and target vectors #2 (disease-related vectors, target vectors). HEK293T was modified to induce infection by shRNA in HeLa cell lines with low susceptibility to TRAIL and GFP-DR5 cells with deficient death domain. shRNA selection agents such as Doxycycline and GFP-DR5 were cultured in G418 culture medium, DR5 was detected on cell membrane, and Pacific blue labeled antibody was used to detect light, shRNA and co-vector were introduced into TagRFP-producing cells, and DR5 was detected on cell membrane of GFP-producing cells, parent cells, and DR5 was detected on cell membrane. FACS was performed successfully. DR5 high is 0.7% concentrated, DR 5 high is 50% concentrated. The expression of DR5 in the cell membrane of TagRFP-positive cells was reduced to about 80% of cells. The cells in the ER domain were observed under microscope, and the cells in the GFP-DR5 domain were observed under microscope. A side, a side. The analysis of the genetic trust of two kinds of cell groups depends on the following.

项目成果

Importin β1 inhibition augments anticancer effect of anti-DR5 agonistic antibody in TRAIL resistant tumor cells

Importin β1 抑制增强抗 DR5 激动性抗体在 TRAIL 耐药肿瘤细胞中的抗癌作用

• 发表时间: 2019
• 作者: Yuko Kojima;Takashi Nishina;Hiroyasu Nakano;Ko Okumura;Kazuyoshi Takeda
• 通讯作者: Kazuyoshi Takeda

Inhibition of Importin β1 Augments the Anticancer Effect of Agonistic Anti-Death Receptor 5 Antibody in TRAIL-resistant Tumor Cells

• DOI: 10.1158/1535-7163.mct-19-0597
• 发表时间: 2020-05-01
• 期刊: MOLECULAR CANCER THERAPEUTICS
• 影响因子: 5.7
• 作者: Kojima, Yuko;Nishina, Takashi;Takeda, Kazuyoshi
• 通讯作者: Takeda, Kazuyoshi