中耳真珠腫腫瘍幹細胞同定：神経堤由来細胞の可能性と腫瘍幹細胞化Key分子の同定

中耳胆脂瘤肿瘤干细胞的鉴定：神经嵴来源细胞的可能性和肿瘤干细胞关键分子的鉴定

• 批准号: 19K09857
• 负责人: 福田 智美
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K09857/
• 关键词: 中耳真珠腫; シングルセル解析; 腫瘍幹細胞; 腫瘍幹細胞化Key分子

本研究では、中耳真珠腫腫瘍幹細胞系譜同定、腫瘍幹細胞化Key分子(マーカー分子)同定、幹細胞の腫瘍化から正常分化への誘導を試み新規保存治療開発を目的とする。中耳真珠腫は上皮系細胞と間葉系細胞の混合的な細胞集団から構成されており、培養系では再現できずまた動物モデルではそのサンプル量が少ないことから、同一個体での個々の細胞集団を解体し解析することが困難であった。「シングルセル（単一細胞）解析」は腫瘍に含まれる細胞を個別に解析していく研究方法であり、細胞集団を解析して平均値を捉えるこれまでの手法では見逃されてきた新しい細胞種、またこれまでにないレベルで細胞機能を解明できると考え、本研究を立ち上げた。昨年度までの研究で、神経堤細胞(GFP陽性細胞)が中耳真珠腫形成において重要な役割を果たしている可能性が示唆された。また組織から単一細胞への分離する方法論（シングルセル化）の条件設定はできた。本年度はWnt1EGFPマウスを用いて中耳真珠腫モデルマウスを作製し、正常耳マウスと中耳真珠腫モデルマウスより中耳組織を採取後一細胞に分離し、MPP-300Z マイクロピック＆プレース CompassZ システム（ネッパジーン）を用い一細胞分離し、各々の群43個分出しNEBキットでcDNAライブラリー作製し、シングルセル解析を行った。結果、各群でのGFP陽性細胞の含有率が低く、トランスクリプトーム解析を行うことはできなかった。そこで、まずはWnt1EGFPマウスの正常中耳組織より初代培養細胞を樹立し、UnipicK 1細胞・組織ピッキング装置（ネッパジーン）を用い各群よりGFP陽性細胞の抽出を行った。

The purpose of this study is to で で, to determine the pedigpedigof stem cells for middle ear bead abscess, to determine the Key molecules for stem cell transformation of abscess (で カ カ カ で molecules), to determine the normal differentiation of stem cell <s:1> abscess transformation み ら, to induce を trial み, and to develop a new regulation for preservation and treatment of み. Middle ear pearls swollen は epithelial cell among と leaf cells of な の mixed set 団 か ら constitute さ れ て お り, cultivate で は reappearance で き ず ま た animal モ デ ル で は そ の サ ン プ ル fewer が な い こ と か ら, the same individual で の a 々 の cells sets 団 を disintegration し parsing す る こ と が difficult で あ っ た. "シ ン グ ル セ ル (単 cells) parsing" は swollen sores に containing ま れ る cells を individual に parsing し て い く research methods で あ り, cell set 団 を parsing し て on average numerical を catch え る こ れ ま で の gimmick で は see fled さ れ て き た new し い cells, ま た こ れ ま で に な い レ ベ ル で cell function を interpret で き る と え test, this study を ち on げ た. Yesterday annual ま で の research で, god 経 dike cells (GFP positive cells) が middle ear pearls swollen formation に お い て important な "を cut fruit た し て い が る possibility in stopping さ れ た. ま た organization か ら 単 a cell へ の separation す る methodology (シ ン グ ル セ ル) の conditions set は で き た. This year's は Wnt1EGFP マ ウ ス を with い て middle ear pearls swollen モ デ ル マ ウ ス を cropping し, normal ear マ ウ ス と middle ear pearls swollen モ デ ル マ ウ ス よ り middle ear tissue を taken after a cell separation に し, MPP - 300 - z マ イ ク ロ ピ ッ ク & プ レ ー ス CompassZ シ ス テ ム (ネ ッ パ ジ ー ン) を with a cell separation い し, various 々 の group of 43 cent gives し NEB キ ッ ト で cDNA ラ イ ブ ラ リ ー as し, シ ン グ ル セ ル parsing line を っ た. Results, each group of で の の GFP positive cells containing rate low が く, ト ラ ン ス ク リ プ ト ー ム parsing line を う こ と は で き な か っ た. そ こ で, ま ず は Wnt1EGFP マ ウ ス の normal middle ear tissue よ り original culture cell を set し, 1 cell, tissue ピ UnipicK ッ キ ン グ device (ネ ッ パ ジ ー ン) を い each swarm よ り GFP positive cells line の drew を っ た.

项目成果

Menin-MLL inhibitor blocks progression of middle ear cholesteatoma in vivo

Menin-MLL 抑制剂可阻断体内中耳胆脂瘤的进展

• DOI: 10.1016/j.ijporl.2020.110545
• 发表时间: 2021
• 期刊: International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology
• 影响因子: 1.5
• 作者: Yamamoto-Fukuda Tomomi;Akiyama Naotaro;Tatsumi Norifumi;Okabe Masataka;Kojima Hiromi
• 通讯作者: Kojima Hiromi

L1CAM-ILK-YAP Mechanotransduction Drives Proliferative Activity of Epithelial Cells in Middle Ear Cholesteatoma

L1CAM-ILK-YAP 机械转导驱动中耳胆脂瘤上皮细胞的增殖活性

• DOI: 10.1016/j.ajpath.2020.04.007
• 发表时间: 2020
• 期刊: The American Journal of Pathology
• 作者: Yamamoto-Fukuda Tomomi;Akiyama Naotaro;Kojima Hiromi
• 通讯作者: Kojima Hiromi

Super-enhancer Acquisition Drives FOXC2 Expression in Middle Ear Cholesteatoma

• DOI: 10.1007/s10162-021-00801-7
• 发表时间: 2021-04
• 期刊: Journal of the Association for Research in Otolaryngology
• 作者: Tomomi Yamamoto-Fukuda;Naotaro Akiyama;H. Kojima