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Lysosomal dysfunction and its pharmacological treatment in autism spectrum disorders

自闭症谱系障碍中的溶酶体功能障碍及其药物治疗

基本信息

批准号：
18K07592
负责人：
朱紅
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

一昨年度までに、ミクログリア、樹状細胞（dendritic cell）および未分化なグリオーマ細胞に高発現する糖タンパクGpnmb (glycoprotein nonmetastatic melanoma b)がライソゾーム標識抗原CD68(ED1)などと同時局在することを見出していた。今後このタンパクが神経系の発達・成長に果たす役割を調べるために、高純度の組換え型Gpnmbタンパクを得ることを目指している。このタンパクをコードするcDNAを大腸菌に導入して大量発現・精製する実験を開始した。推定膜貫通領域およびカルボキシル末端を除いた部分を融合タンパクとして大量発現させることに成功した。その後、精製条件の最適化を試みたが、適切な精製条件を見つけられないままであった。そこで、哺乳類細胞であるExpi Expression　Systemを試したところ、高い発現レベルを得られることことが判った。糖鎖付加がタンパク機能に与える影響があるかも知れないことも考慮すると、発現系を大腸菌から哺乳類細胞に切り替える方が今後利点が多いことが予想された。そこで。主としてExpi293F細胞の発現させたGpnmbタンパクの大量精製を進めることに方針を変更した。現在、大量精製方法を改良するとともに、神経系細胞の培養を開始し、Gpnmbタンパクが初代培養ニューロンおよび神経由来培養細胞株の電気的膜興奮性・分化・増殖に与える影響、およびミクログリアのライソゾーム安定化作用の有無を調べるための予備実験を進めている。

In the past year, the expression of Gpnmb (glycoprotein nonmetastatic melanoma b) in dendritic cells and undifferentiated dendritic cells has been detected. In the future, the development and growth of the nervous system will result in the adjustment of the structure and the formation of high-purity Gpnmb. The introduction of cDNA into E. coli and the development and purification of large quantities of cDNA have begun. Presumably, the membrane penetration area is very small, and the end of the membrane is very small. The optimization of refining conditions and refining conditions can be achieved by optimizing the refining conditions. Mammalian cell Expi Expression System test, high middle development The sugar chain adds to the function of the enzyme and the effect of the enzyme.そこで。Main Exp. 293F cell development, Gpnmb development, mass refining, policy change Now, the improvement of mass purification method, the start of culture of nervous system cells, the development of Gpnmb culture system, the membrane excitability, differentiation, proliferation and influence of electrical activity of cultured cells of nervous system origin, the presence or absence of regulation of the stabilization effect of cell culture system, and the preparation of cell culture system.