乳腺アポクリン癌の細胞形態とPI3K遺伝子変異との関連性の解明

点击翻译按钮获取中文摘要

癌細胞の形態から分子治療標的となる遺伝子異常の存在が予測できるかどうかを明らかにし、病理形態診断の新たな可能性にせまることを目的としている。前年度までに、PIK3CA遺伝子変異ホットスポット部に変異が認められていない乳癌培養細胞（HCC1428）をもちいて、PIK3CA遺伝子exon 20のkinase domainで ある(H1047R[c.3140A>G])部位の遺伝子変異導入を、CRISPR-Cas9法を用い、エレクトロポレーション法にて行った。変異導入後の細胞よりDNAを抽出し、制限酵素法およびダイレクトシーケンス法を用いて検索し、変異導入が行われていることは確認された。次に導入細胞について、変異導入細胞の選別を試みたが、増殖が遅いためか、conditioned mediumなどを用いて生育を促したものの、シングルセルクローニングが困難であった。ヒト乳癌手術検体をもちいて、PIK3CA遺伝子変異解析についての検討を行うために、前年度に作成済のTMAブロックをもちいて、組織切片作成・DNA抽出を行ったが、ブロックを作成してから時間が経過していたためか、DNA抽出およびpcr法による遺伝子増幅が困難であった。RNA抽出後にcDNA合成、pcr法による遺伝子増幅も試みたが、やはり検出困難であった。そこで、ブロック作成からより経過年数の浅いブロックをもちい、DNA抽出、pcr増幅の検討を行ったところ、検出が可能であった。よって、経過年数の浅いアポクリン癌（術前療法無し）とその対象となる浸潤癌を選出し、DNA抽出とpcr法による遺伝子増幅、PIK3CA遺伝子変異解析を施行中である。