正常Bリンパ球由来iPS細胞を用いた多発性骨髄腫の発生機序の解明

使用源自正常 B 淋巴细胞的 iPS 细胞阐明多发性骨髓瘤的发育机制

• 批准号: 18K15221
• 负责人: 柳 亜希
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K15221/
• 关键词: 多発性骨髄腫; iPS細胞; B細胞分化; 造血前駆細胞; 染色体転座; AID; Bリンパ球由来iPS細胞

最終年度では、分化手法の確立と研究に使用する遺伝子改変iPS細胞の樹立を並行して行いました。本研究ではiPS細胞からB細胞への分化実験を繰り返す必要があるため、より効率の良い分化条件の確立が重要となります。そこで、本研究に使用しているB細胞由来のiPS細胞株を用いて、市販のキットを用いた新たな手法での造血前駆細胞への分化を試みたところ、分化効率の改善に成功しました。これにより、以前より安価かつ少ない労力で良質かつ多量の造血前駆細胞が得られるようになりました。また、本手法で得られた造血前駆細胞の分化能を検証したところ、リンパ球系の細胞へと分化可能であることが確認できました。また、Cre/loxPシステムを用いて染色体転座t(11;14)を誘導可能なiPS細胞株の樹立を進めました。接着細胞を用いて本システムで実際に染色体転座が誘導されることを確認しまし、iPS細胞でも導入実験を進めています。樹立が終わり次第こちらも分化実験を進める予定です。加えて、これまでに樹立した遺伝子改変iPS細胞の分化実験も進めました。樹立した細胞株は、造血前駆細胞へと分化可能であり、また分化能に異常は見られませんでした。さらに、iPS細胞から分化させた造血前駆細胞をマウス移植またはストローマ細胞との共培養によりB細胞へと分化させる実験も進めています。こちらについてはまだ分化結果が得られておりません。今後は樹立したiPS細胞株を用いてB細胞への分化実験を進め、実際に多発性骨髄腫の起源となるような異常B細胞が分化するのか確認する予定です。

In the final year, differentiation methods were established and studies were carried out on the use of genetic modification iPS cells. In this study, it is important to establish the necessary conditions for differentiation of iPS cells and B cells. In this study, we successfully used new methods to test the differentiation of hematopoietic progenitor cells using B-cell derived iPS cell lines. In the past, there was a lack of strength in the quality and quantity of hematopoietic cells. This method was used to confirm the differentiation potential of hematopoietic progenitor cells. Cre/loxP gene expression system was used to induce iPS cell lines at chromosome locus t(11;14). Then, the cells were confirmed to be able to induce chromosome loci in the middle of the cell cycle, and the cells were introduced into the middle of the cell cycle. Set up the final stage, divide the stage and advance the stage. The differentiation of iPS cells was improved by increasing the number of cells. The differentiation of hematopoietic progenitor cells is abnormal. In addition, iPS cells are differentiated into hematopoietic progenitor cells and transplanted into B cells in co-culture. The result of this process is that In the future, the establishment of iPS cell lines and the development of B cell differentiation will be determined. In fact, the origin of multiple osteomas and the identification of abnormal B cell differentiation will be determined.

项目成果

Bリンパ球由来iPS細胞からの骨髄腫細胞の起源となる異常Bリンパ球作成の試み

尝试从 B 淋巴细胞衍生的 iPS 细胞中产生异常 B 淋巴细胞（骨髓瘤细胞的起源）

• 发表时间: 2018
• 作者: 柳 亜希;柳 亜希
• 通讯作者: 柳 亜希

B細胞由来のiPS細胞へのCRISPR/Cas9による染色体転座t(11;14)およびp53 欠失の導入

通过 CRISPR/Cas9 将染色体易位 t(11;14) 和 p53 缺失引入 B 细胞衍生的 iPS 细胞

• 发表时间: 2019
• 作者: 石原 誠一郎;温田 晃弘;芳賀 永;柳 亜希
• 通讯作者: 柳 亜希

Attempt to prove the existence of abnormal B lymphocyte as myeloma-initiating cells from B cell-derived induced pluripotent stem cells.

试图证明B细胞衍生的诱导多能干细胞中异常B淋巴细胞作为骨髓瘤起始细胞的存在。

• 发表时间: 2018
• 作者: Yanagi A;Tsuyama N;Yanai Y;Abe Y;Sugai M;Ota A;Sivasundaram K;Shigemura T;Sasatani M;Kamiya K;Hanamura I;Ikezoe T;Onodera M;Sakai A
• 通讯作者: Sakai A