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The development of biomarkers for prodromal Parkinson disease using a novel rat model.

使用新型大鼠模型开发前驱帕金森病的生物标志物。

基本信息

批准号：
18K15450
负责人：
上村麻衣子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

細菌人工染色体（bacterial artificial chromosome：BAC）に、遺伝子発現調節領域とヒト変異α-Syn遺伝子を組み込み作製した遺伝子改変ラット（A53T-BAC-SNCA Tgラット）の詳細な表現系解析を行った。3ヶ月齢、9ヶ月齢、18ヶ月齢のラットを病理学的および生化学的に解析し、リン酸化シヌクレインの増加および月齢依存的な黒質緻密部のドパミン神経細胞脱落を確認した。また、18ヶ月齢のA53T-BAC-SNCA Tgラット（n=5）および野生型ラット（n=5）の脳脊髄液を採取し、カラム法を用いてエクソソームを抽出した。このエクソソームを用いて液体クロマトグラフィー質量分析法（Liquid Chromatography-Mass spectrometry: LC/MS）にてプロテオーム解析を行い、1092個の蛋白を同定した。A53T-BAC-SNCA Tgラットと野生型ラットを比較し、A53T-BAC-SNCA Tgラットで発現が上昇している蛋白（35個）および低下している蛋白（8個）を選出した（Cut-off値：P < 0.001）。選出した蛋白の中から膜貫通ドメインをもつ蛋白を発現上昇群および発現低下群からそれぞれ3個ずつ選出し、エクソソームELISAにて検証を予定している。また、パーキンソン病患者（n=8）と疾患対照群患者（n=8）の脳脊髄液を採取し、エクソソームを抽出してLS/MSにてプロテオーム解析を行った。その結果、A53T-BAC-SNCA Tgラットとパーキンソン病患者群とで共通して変動している蛋白は同定できなかった。今後、Prodromal stageとしてレム睡眠行動異常症の患者群をリクルートして同様に脳脊髄液中エクソソームのプロテオーム解析を行い、A53T-BAC-SNCA Tgラットの結果と比較検討する予定である。

Bacterial artificial chromosome (BAC), gene expression regulatory domain, different α-Syn gene group, gene control, gene transformation (A53T-BAC-SNCA Tg transformation) and detailed phenotype analysis. 3 months, 9 months, 18 months, the pathological and biochemical analysis, acidification, increase, and month-dependent substantia nigra dense part of the brain cell exfoliation confirmed A53T-BAC-SNCA Tg profile (n = 5) and wild-type profile (n = 5) were extracted from the A53T-BAC-SNCA T-profile by the appropriate method. Liquid Chromatography-Mass spectrometry (LC/MS) was used to analyze 1092 proteins. A53T-BAC-SNCA Tg shift was higher than that of wild type (35 proteins) and lower than that of wild type (8 proteins)(Cut-off value: P < 0.001). Select protein in the middle of the membrane through the screen to detect protein in the rising group and in the low group to detect protein in the middle of the membrane through the screen to detect protein in the low group. Select three screen to detect protein in the middle of the membrane through the screen to detect protein in the low group. The spinal fluid was collected from patients with chronic diseases (n = 8) and from patients with chronic diseases (n=8). A53T-BAC-SNCA Tg is the most common type of protein in patients. In the future, Prodromal stage and sleep movement disorder patient groups will be divided into different groups, and the results of A53T-BAC-SNCA Tg shift will be compared and discussed in the same way.