Elucidation of physiological role of four CNS barriers in human based on the establishment of next generation transporter assay method

中枢関門細胞の輸送担体の機能解析を行う上で、効率よく遺伝子導入できる技術は有用である。従来のリポフェクション法は、導入効率が悪く、導入される細胞の割合は、全体の10%以下であった。対照的に、ssPalm脂質を用いたナノ粒子に遺伝子を搭載し導入した場合、95％の細胞に導入することに成功した。各種in vitro系やin vivo系を用いた解析によって、血液クモ膜関門のoat1/slc22a6やoat3/slc22a8は有機アニオンの脳脊髄液からの排出に寄与することが明らかとなった。定量プロテオミクスSWATH法とクロスリンク法を融合させることによって、目的の化合物を輸送する輸送担体を効率よく同定する手法「Proteomics-based Identification of transporter by Crosslinking substrate in Keyhole (PICK)」法を開発した。血液脳関門において有機カチオン性化合物を脳内へ供給輸送する新規輸送担体複合体TM7SF3/LHFPL6を発見し、輸送特性を決定した。論文発表済みである。また、いくつかの輸送担体について、高発現させたin vitro細胞株とその親細胞株（発現させていない）を用いて、基質である化合物に対する輸送速度を計測し、高発現株と親細胞株の差からトランスポーターの輸送活性を求めた。最新の液体クロマトグラフィ接続型質量分析装置を用いて、その細胞株における該当トランスポータータンパク質の存在量を定量した。輸送活性を存在量で割ることによって、1 molあたりの輸送活性を解明した。1 molあたりの輸送活性を、血液脳関門におけるトランスポーターのタンパク質存在量(mol)と統合することによって、in vivo血液脳関門での輸送活性を再構築した。

中枢関門細胞の輸送担体の機能解析を行う上で、効率よく遺伝子導入できる技術は有用である。従来のリポフェクション法は、導入効率が悪く、導入される細胞の割合は、全体の10%以下であった。対照的に、ssPalm脂質を用いたナノ粒子に遺伝子を搭載し導入した場合、95％の細胞に導入することに成功した。各種in vitro系やin vivo系を用いた解析によって、血液クモ膜関門のoat1/slc22a6やoat3/slc22a8は有機アニオンの脳脊髄液からの排出に寄与することが明らかとなった。定量プロテオミクスSWATH法とクロスリンク法を融合させることによって、目的の化合物を輸送する輸送担体を効率よく同定する手法「Proteomics-based Identification of transporter by Crosslinking substrate in Keyhole (PICK)」法を開発した。血液脳関門において有機カチオン性化合物を脳内へ供給輸送する新規輸送担体複合体TM7SF3/LHFPL6を発見し、輸送特性を決定した。論文発表済みである。また、いくつかの輸送担体について、高発現させたin vitro細胞株とその親細胞株（発現させていない）を用いて、基質である化合物に対する輸送速度を計測し、高発現株と親細胞株の差からトランスポーターの輸送活性を求めた。最新の液体クロマトグラフィ接続型質量分析装置を用いて、その細胞株における該当トランスポータータンパク質の存在量を定量した。輸送活性を存在量で割ることによって、1 molあたりの輸送活性を解明した。1 molあたりの輸送活性を、血液脳関門におけるトランスポーターのタンパク質存在量(mol)と統合することによって、in vivo血液脳関門での輸送活性を再構築した。