腸管由来IgA抗体を利用した、新規抗菌薬ターゲット因子の探索

使用肠源性 IgA 抗体寻找新型抗生素靶因子

• 批准号: 19K21255
• 负责人: 石垣 佳祐
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-08-24 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K21255/
• 关键词: IgA; 腸内細菌; 耐性菌

近年、薬剤耐性菌の蔓延が世界的な問題となっており、既存の抗菌薬とは異なる作用点を持つ抗菌薬の開発が求められている。腸管環境の維持に重要な働きを担う腸管由来 IgA 抗体が腸内の「悪玉菌」を認識するという知見から、腸管 IgA抗体が認識・結合する分子は細菌が生存・増殖にとって真に必要な因子である可能性が考えられる。 そこで本研究では過去の抗菌薬とは異なる作用点を標的とする薬剤創出に向け、IgA抗体を利用した免疫学的スクリーニングを行うことで、細菌が宿主内で増殖する、あるいは病原性を発現するために真に必要な因子の同定を目指す。研究初年度である本年度は、野生型C57BL/6マウス、Balb/cマウスを用いて、小腸から粘膜固有層細胞を回収し、IgA抗体産生ハイブリドーマの作製を試みた。従来法に加え、試薬や手法を検討することでいくつかのクローンを得て、ELISA法によって上清中に含まれる抗体がIgA 抗体であることの確認とその場合の抗体価を測定した。 またディフィシル菌などの細菌を投与することでマウスの免疫系を刺激した後、IgA抗体産生ハイブリドーマの作製を試みた。またすでに取得したIgA抗体を用いて、種々の病原細菌の細菌溶解液に対してウェスタンブロットを行い、これらの細菌に特異的なバンドを検出した。 中でも大腸菌やディフィシル菌を用いて2次元電気泳動・質量分析を行い、該当するIgA抗体が特異的に認識している細菌のタンパク質候補を取得した。

In recent years, the spread of drug-resistant bacteria in the world has become a problem, and existing antibacterial agents have different points of action. The importance of intestinal environment maintenance is related to the possibility of intestinal origin IgA antibody recognition, intestinal IgA antibody recognition and binding to molecules necessary for bacterial survival and proliferation. This study is aimed at identifying factors necessary for the development of pathogenic bacteria in host cells and for the development of immune systems. In the beginning of the study, the wild-type C57BL/6 cells, Balb/c cells and IgA antibody production were tested. The method for determination of IgA antibodies in supernatant by ELISA is described in detail below. The immune system is stimulated by the presence of IgA in the body. The IgA antibody was obtained from the bacterial lysate of the pathogenic bacteria and detected from the bacterial lysate of the pathogenic bacteria In addition, we also conducted two-dimensional electrokinetic mass analysis of E. coli and E. coli, and obtained the candidate for IgA antibody specific to E. coli and E. coli.