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空間記憶に関連した海馬細胞の発火特性と遺伝子発現プロファイルの解析

海马细胞空间记忆相关放电特征及基因表达谱分析

基本信息

批准号：
22KJ0316
负责人：
柳下晴也
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0316/
关键词：
海馬記憶単一細胞遺伝子発現解析電気生理学 SWR

项目摘要

本年度は、In vivo条件で発火活動を記録した神経細胞を網羅的に遺伝子発現解析する手法（Spike-seq法）の立ち上げを行った。実験法の概要は以下の通りである。まず、In vivo条件でガラス微小電極を用い、単一神経細胞の発火活動を記録する。最大で2時間記録したのち、記録電極から最適化した条件の電気パルスを印加することで、記録した細胞のみを蛍光標識する。直後に記録脳領域の急性切片を作成し蛍光顕微鏡で観察することで記録細胞を同定する。同定した細胞はガラスピペットを用いて顕微鏡下で回収し、単一細胞RNAシーケンス法により網羅的に遺伝子発現解析を行う。以上の実験法の各条件を検討することで、本手法の確立に成功した。さらに条件検討を進め、当初10％以下であった成功率を40％程度まで改善し、スループットを向上した。本手法を用いて、ウレタン麻酔下の背側海馬を標的とし、脳波と発火活動を同時に記録した48細胞を回収した。本サンプルについて、記憶に関連する海馬特有の脳波として知られているSharp Wave Ripple (SWR)に着目した解析を実施した。記録した神経細胞がSWR発生中にどのしやすいかを解析したところ、海馬に存在する神経細胞であってもその程度は非常にばらつきが存在することを見出した。今後はこれらの発火しやすさの違いと関連する遺伝子を遺伝子発現解析により探索する。さらに、候補となる遺伝子を免疫染色法やウイルスを用いて操作することで、記憶やSWRにおける役割を検証する。

This year's online and In vivo conditional fire activities have been recorded on the Internet, and the analysis method (Spike-seq method) is available on the Internet. In the summary of the Law, the following general information is available. The temperature and In vivo conditions affect the use of micro-electrodes, and the activity records of fire activities are recorded. The maximum 2-hour recording time, the maximum recording time and the maximum recording time. After that, the acute section in the field is made into a light microscope to observe the memory cells. In the same way, you can use the user microphone to return the message, and then use the user name of the RNA user to access the user of the Internet. All the conditions of the above method and this method ensure the success of the law. The conditions have improved, the success rate of less than 10% has improved by 40%, and the success rate has improved. This technique is used to record 48 cells at the same time in the fire activity of the sea horse. In this paper, we need to know that the sea is unique to Sharp Wave Ripple (SWR), and that it is necessary to analyze and analyze the problems. Remember that there is a great deal of trouble in the life of SWR. There is a lot of evidence that there is a problem. In the future, you will find out that you are going to explore something. Please tell me how to use the immunostaining method to make sure that you are not in service, and that you can use the SWR operation to do this.