自己複製能を有する人工ウイルスの創製

创造具有自我复制能力的人造病毒

• 批准号: 22KJ2296
• 负责人: 坂本 健太郎
• 金额: $ 2.33万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2296/
• 关键词: 人工ウイルス; 自己複製; RNA結合ドメイン; 人工ウイルスキャプシド

本研究では、自己複製能を有する人工ウイルスの創製に向けた各種構成要素の作製に取り組んでいる。前年度は、細胞内に自己をコードするようなmRNAを送達できる人工ウイルスキャプシドを構成するlambdaN-beta-annulus-infectious peptideの合成に取り組んだ。ここで、lambdaNはBoxBというRNA配列と相互作用するペプチド、beta-annulusは水中で自己集合し人工ウイルスキャプシドを形成するペプチド、infectious peptideは細胞への感染に関与することが期待されるペプチドである。より良いinfectious peptideを得るために6種類のinfectious peptideを選出し、それぞれのlambdaN-beta-annulus-infectious peptideの合成に取り組んだ。Native chemical ligation, 無細胞タンパク質発現系では芳しい結果が得られなかったが、大腸菌でのタンパク質発現を通して目的のペプチドを得ることに成功した。これと並行して、lambdaN-beta-annulus-infectious peptideによる細胞内へのmRNA送達能を評価するためのreporter mRNAの設計及び作成にも取り組んだ。EGFPの上流にT7 promoterおよびinternal ribosomal entry site (IRES) を、下流にスペーサーを介してBoxBを有するように転写されるよう設計したプラスミドからin vitro transcription, ポリAテール付加によってreporter mRNAを得ることに成功した。これをHepG2細胞にトランスフェクションするとEGFPの発現が確認されたことから、設計したmRNAがレポーターとして機能することが示唆された。

In this study, we found that there was no artificial replication ability, and we chose the combination of various components. In the past year, the synthesis of lambdaN-beta-annulus-infectious peptide was selected from the group consisting of artificial lambdaN-beta-annulus-infectious peptide. The lambdaN Box B contains RNA and interacts with it in the form of an artificial peptide. The peptide is expected to be involved in cellular infection. 6 kinds of infectious peptide were selected and synthesized from lambdaN-beta-annulus-infectious peptide. Native chemical ligation, cell-free protein production system, results in the successful production of E. coli. In addition, lambdaN-beta-annulus-infectious peptide can be used to evaluate the intracellular mRNA delivery function, and the design and construction of reporter mRNA can be used to evaluate the intracellular mRNA delivery function. EGFP upstream T7 promoter and internal ribosomal entry site (IRES), downstream T7 promoter and internal ribosomal entry site (IRES). The expression of EGFP in HepG2 cells was confirmed by PCR, and the expression of EGFP in HepG2 cells was designed by PCR.

项目成果

人工ウイルスキャプシドによる生体高分子のサイトゾル送達

通过人工病毒衣壳进行生物聚合物的胞质递送

• 发表时间: 2021
• 作者: Sakamoto Kentarou;Furukawa Hiroto;Arafiles Jan Vincent V.;Imanishi Miki;Matsuura Kazunori;Futaki Shiroh;坂本 健太郎
• 通讯作者: 坂本 健太郎

生体高分子をサイトゾルに送達する人工ウイルスキャプシド

将生物聚合物输送到细胞质的人工病毒衣壳

• 发表时间: 2021
• 作者: Sakamoto Kentarou;Furukawa Hiroto;Arafiles Jan Vincent V.;Imanishi Miki;Matsuura Kazunori;Futaki Shiroh;坂本 健太郎;坂本 健太郎
• 通讯作者: 坂本 健太郎

Artificial Nanocage Formed via Self-Assembly of β-Annulus Peptide for Delivering Biofunctional Proteins into Cell Interiors

通过 β-环肽自组装形成人工纳米笼，用于将生物功能蛋白递送到细胞内部

• DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.1c00534
• 发表时间: 2022
• 期刊: Bioconjugate Chemistry
• 影响因子: 4.7
• 作者: Sakamoto Kentarou;Furukawa Hiroto;Arafiles Jan Vincent V.;Imanishi Miki;Matsuura Kazunori;Futaki Shiroh
• 通讯作者: Futaki Shiroh