Development of high-resolution pulse-chase method by use of click chemical reaction

利用点击化学反应开发高分辨率脉冲追踪方法

• 批准号: 23657126
• 负责人: FUJIMOTO Toyoshi
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23657126/
• 关键词: 膜脂質; 凍結割断レプリカ標識法; クリック反応; 電子顕微鏡; 凍結割断レプリカ

Cells cultured with precursor molecules bearing an alkyl or an azido group were quick-frozen and freeze-fracture replicas were subjected to click chemical reaction to label membrane lipids and proteins for electron microscopy. The labeling for phosphatidylcholine increased in a time-dependent manner after the precursor treatment. In budding yeast, the labeling density in the endoplasmic reticulum, nuclear membrane, mitochondrion, and vacuole was equivalent in the two membrane leaflets, whereas that in the plasma membrane showed clear asymmetry.

将带有烷基或叠氮基的前体分子培养的细胞快速冷冻，并将冷冻断裂复制品进行点击化学反应以标记膜脂质和蛋白质用于电子显微镜。前体处理后，磷脂酰胆碱的标记以时间依赖性的方式增加。在芽殖酵母中，内质网、核膜、胞囊和液泡中的标记密度在两个膜小叶中是相等的，而在质膜中的标记密度表现出明显的不对称性。

项目成果

ホスファチジルコリンの代謝的ラベル化と非対称性分布解析

磷脂酰胆碱的代谢标记和不对称分布分析

• 发表时间: 2013
• 作者: 伊吉祥平;藤本豊士
• 通讯作者: 藤本豊士

電子顕微鏡による膜脂質ドメインの解析

通过电子显微镜分析膜脂结构域

• 发表时间: 2013
• 作者: 依光朋宏;佐藤 健;佐藤 健;藤本豊士
• 通讯作者: 藤本豊士

Nanoscale distribution of phospholipids observed by electron microscopy

电子显微镜观察磷脂的纳米级分布

• 发表时间: 2011
• 作者: Kametaka;Satoshi;Toyoshi Fujimoto
• 通讯作者: Toyoshi Fujimoto