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複数の遺伝子領域が関与する糸状菌二次代謝物の構造多様化機構の解明

阐明涉及多个基因区域的丝状真菌次生代谢产物的结构多样化机制

基本信息

批准号：
21K14795
负责人：
岸本真治
金额：
$ 3万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度においてフミマイシンとレントフラニンがAlterクラスター中の遺伝子とそれと全く異なる遺伝子領域に存在する遺伝子AlsidEとの働きで生合成されていることを明らかにしていた。本年度においてはこれらの詳細な形成機構の解明を行った。大腸菌を用いて調製したAlSidEに基質を加えた酵素反応溶液にAlterクラスター産物を模したメトキシヒドロキノンを添加するとフミマイシン様の化合物が生成する。このフミマイシン様の化合物生成に直接AlSidEが関与するのかを確かめるために、AlSidEの酵素反応溶液から限外濾過で酵素のみを除きメトキシヒドロキノンを添加したところ、同様にフミマイシン様化合物の生成が確認された。このことからAlSidEは反応性の高い化合物を生成していることが判明した。一方、AlSidEは非リボソームペプチド合成酵素（NRPS）と総称される酵素の一種で、複数のドメインから形成されている。このドメイン構造を解析すると末端が分子内環化を担うCTドメインであったことから、AlSidEの真の産物はアズラクトンと呼ばれる構造を有するフマリルアズラクトンと予想した。アズラクトンは加水分解を容易に受けてしまう構造であるためこれまでに天然から見出されたことはない。そこでAlSidEの酵素反応溶液を反応後速やかにLC-MSで分析したところ、別途化学合成したフマリルアズラクトンと一致する化合物ピークを見出すことができた。また、フミマイシンやレントフラニンの生産菌であるAspergillus lentulusの培養液や、AlsidEのホモログ遺伝子を有する他の糸状菌の培養液から同様にフマリルアズラクトンを検出することができた。アズラクトンを有する化合物の天然からの検出例はこれまでになく、微生物の二次代謝の常識を覆す発見を世界に先駆けて成し遂げることができたといえる。

In the past year, the number of children in the Alter family has increased. In the past year, the number of children in the Alter family has increased. In the past year, the number of children in the Alter family has increased. In the past year, the number of children in the Alter family has increased. This year's annual report was published in detail. Coliform bacteria are used to modulate the substrate, add enzyme reaction solutions, and produce compounds. The production of these compounds was confirmed by direct AlSidE reaction and enzyme reaction solution filtration. The formation of high molecular weight compounds was identified. One side, AlSidE is not a free radical synthesis enzyme (NRPS), and the other side is a complex enzyme. The structure analysis of the terminal molecular internalization is carried out in the following ways: The water is easy to decompose. The enzyme reaction solution of AlSid E was analyzed by LC-MS, and the chemical synthesis of AlSid E was analyzed by HPLC. The culture solution of Aspergillus lentulus and Alsid E for the production of Bacillus subtilis is the same as that of Bacillus subtilis. The discovery of natural metabolism of chemical compounds in the world is a matter of common knowledge.