膵がんオルガノイドモデルを用いた腫瘍溶解性ヘルペスウイルスベクターの開発

使用胰腺癌类器官模型开发溶瘤疱疹病毒载体

• 批准号: 21K15986
• 负责人: 黒田 誠司
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15986/
• 关键词: 腫瘍溶解性ヘルペスウイルス; 膵がんオルガノイドモデル

本研究では、新たながん治療モダリティとして注目される腫瘍溶解性ヘルペスウイルス（oHSV）をベースに、膵癌治療に特化した新規oHSVの開発を行う。本目標達成のためにヒト膵がん患者由来サンプルより樹立したヒト膵がんオルガノイドモデルを利用し、実際にヒト膵がんに高い感染・複製能力を示す治療効果の高い新規oHSVの開発・特性解析を行う。前年度までに我々はoHSVに対してBacterial artificial Chromosome（BAC）を挿入したoHSV-BACを構築し、その構造解析・機能解析からoHSV-BACは元のoHSVの構造を保ちつつ、大腸菌内での遺伝子操作が可能であることを確認した。本年度は、樹立したoHSV-BACの複数のクローンについて全シークエンス解析を実施した。その結果、配列レベルでoHSV-BACは大腸菌内でもoHSVの遺伝情報を忠実に保っていることが明らかとなった。現在、作製したoHSV-BACを用いて新規oHSV作製のための遺伝子改変を進めている。一方、樹立した膵がんオルガノイドモデルについて特性解析を進め、由来となる腫瘍の性質が保持されていることを確認した。加えてヒト膵がん３次元培養モデルとして、新たにヒト膵がんスフェロイドモデル、浮遊培養モデルを構築した。実験系に応じてこれらを併用する。作製したヒト膵がん３次元培養モデルに対するoHSVの感染能力及び殺傷性を評価するために、ヒト膵がん２次元培養あるいはスフェロイド３次元培養モデルに対して感染試験を行った。その結果、oHSVは２次元培養においては膵がん細胞に効率的に感染し殺傷する一方、３次元培養モデルでは感染性・殺傷性ともに２次元培養と比較して効率が大幅に落ちることが判明した。引き続き、oHSVの３次元培養モデルにおける特性を解析するとともに、BAC化されたoHSV-BACの遺伝子改変を進めていく。

In this study, we pay close attention to the clinical application of soluble drugs (oHSV), cancer treatment specialization (oHSV), and cancer treatment. The purpose of this article is to determine the cause of the disease, the cause of the disease, the utilization of the virus, the ability to replicate infection and the analysis of the characteristics of the new oHSV. In the previous year, we imported the oHSV-BAC data Bacterial artificial Chromosome (BAC) into the oHSV-BAC system, and the parser was able to parse the oHSV-BAC data, create the oHSV data, and make sure that the operation of the cluster in the bacteria could be verified. This year, the number of copies of this year's oHSV-BAC will be duplicated. Check the results and arrange the oHSV information in oHSV-BAC bacteria. Please make sure that the information is clear. Now, as a general oHSV-BAC, we use the new rule oHSV to modify the performance of the new regulations. On the one hand, it is necessary to improve the analysis of the characteristics of the system, and the reason is to ensure that the performance is maintained. Add three-dimensional training to make sure that you don't know what's going on, and that you don't know what's going on. I don't know how to use it. The ability to infect oHSV and the ability to infect patients were detected in three-dimensional training and two-dimensional training. The results showed that the infection rate of oHSV 2-dimensional culture was significantly higher than that of 3-dimensional culture. Introduction, oHSV 3-dimensional training to improve the characteristics of the system, BAC to improve the performance of the oHSV-BAC system.

项目成果

Evaluation of purification and storage conditions for herpes simplex virus-based vectors

单纯疱疹病毒载体纯化和储存条件的评估

• 发表时间: 2021
• 作者: Seiji Kuroda;Yoshitaka Miyagawa;Makoto Sukegawa;Motoko Yamamoto;Kumi Adachi;William F. Goins;Justus B. Cohen;Joseph C. Glorioso;and Takashi Okada
• 通讯作者: and Takashi Okada

Impacts of purification and storage methods on the yield and functionality of oncolytic herpes simplex virus.

纯化和储存方法对溶瘤单纯疱疹病毒产量和功能的影响。

• 发表时间: 2022
• 作者: Seiji Kuroda;Yoshitaka Miyagawa;Makoto Sukegawa;Yuriko Sato;Yuka Oyama;Motoko Yamamoto;Kumi Adachi;Mashito Sakai;Goins WF;Cohen JB;Glorioso JC;and Takashi Okada.
• 通讯作者: and Takashi Okada.

高品質遺伝子治療用無毒化ヘルペスウイルス(HSV)ベクターの精製方法および保管条件の検討

用于基因治疗的高质量解毒疱疹病毒（HSV）载体的纯化方法和储存条件的检查

• 发表时间: 2021
• 作者: 黒田 誠司;宮川 世志幸;助川 誠;酒井 真志人
• 通讯作者: 酒井 真志人