Research for predictive indicators of therapeutic response of beta-adrenergic receptor blockers using myocardial tissue of patients with heart failure

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本年度は、研究2年目として、非虚血性拡張型心筋症（NIDCM）患者の心筋組織検体を用いたβ-アドレナリン受容体（AR）シグナル動態評価のうち、（１）免疫組織学的解析と（２）パラフィン包埋心筋組織検体からRNAを抽出する実験を行った。（１）に関しては、臨床および組織学的にNIDCMと診断され新規にβ-AR遮断薬を導入された患者のパラフィン包埋心筋組織検体を用いて、心筋細胞におけるGタンパク質依存的β-ARシグナル動態評価を行った。本研究では、同シグナル伝達経路の下流因子であるGタンパク質共役受容体キナーゼ2、β-arrestin2とcAMP応答配列結合タンパク質のリン酸化に対する抗体を用いて免疫染色を行い、心筋細胞におけるこれら因子の発現だけでなく局在を免疫組織学的に評価した。まず、NIDCM患者の心筋細胞におけるβ-ARシグナル動態評価のため、NIDCM患者と正常心機能患者におけるGタンパク質依存的β-ARシグナル動態の差異について検討を進めた。次に、NIDCM患者のβ-AR遮断薬に対する反応性を予測する有用な指標を探索するため、β-AR遮断薬導入後の左室逆リモデリングの有無でNIDCM患者を層別化し、両群間の臨床所見を比較検討するだけでなく、心筋細胞におけるGタンパク質依存的β-ARシグナル動態の差異を免疫組織学的にも検討した。（２）に関しては、心筋細胞におけるβ-arrestins依存的β-ARシグナル動態をRNAシーケンス解析で評価するため、パラフィン包埋心筋組織検体からRNAを抽出する実験を行った。昨年度内にパラフィン包埋剖検心筋組織検体からRNAを抽出する予備実験を行いRNA抽出に成功したため、本年度は正常心機能患者とNIDCM患者を数例ずつ選択し、約3mmと非常に小さいパラフィン包埋組織からRNAを抽出する実験を行った。