急性腎障害における尿細管細胞ミトコンドリア機能障害を調節するマイクロRNAの同定

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今年度は、急性腎障害を起こしたヒト腎尿細管細胞（HK-2 cell）からミトコンドリアの分離を進めミトコンドリア内でのmiRNAの変化を確かめることを目標とした。しかし、HK-2 cellからのミトコンドリアからの分離はできるが採取できるミトコンドリアの量が非常に少なかった。具体的には、急性腎障害を起こしたHK-2 cellから、mitochondria isolation kitを使用して、尿細管細胞からの分離を試みた。規定の必要な細胞数を満たす急性腎障害を起こした後のfull confluenceの10cm dishからミトコンドリアを分離したが、最終工程にて分離できたミトコンドリアが肉眼で見えるかどうかといったわずかな量しか採取できなかった。実際にメーカーに確認しても、ミトコンドリアの分離できる量は肉眼で見えるかどうかの量しかないとのことであった。その状態から、miRNeasy mini kitを使用してtotal RNAを抽出するもnanodropで計測したところ不純物が多い可能性があり、その次の段階の網羅的解析のマイクロアレイに使用するには、信頼できる結果が出ないと判断した。急性腎障害を起こしたHK-2 cellの細胞数を増やしたり、虚血時間を12－24時間、再灌流時間を4－48時間と急性腎障害の程度を変更する、ミトコンドリアの抽出kitを変更するなどをしても満足いく結果には結びつかなかった。