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脂肪肝グラフトの酸素化灌流修復における小胞体・ミトコンドリア相互作用の意義

内质网-线粒体相互作用在脂肪肝移植氧合灌注修复中的意义

基本信息

批准号：
21K16394
负责人：
石川隆壽
金额：
$ 3万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16394/
关键词：
肝移植臓器灌流ミトコンドリア小胞体脂肪肝

项目摘要

脂肪肝グラフトの利用はドナー不足解消の方策となるが、大滴性脂肪肝は予後不良である。近年、機械灌流 (MP) によって大滴性(30-60%)脂肪肝の虚血再灌流傷害を軽減できることが示された。しかし、脱脂促進剤の効果、至適灌流温度、灌流液、コンディショニング法のコンセンサスは無い。本研究の目的は、脂肪肝の冷保存再灌流傷害を軽減する新しい肝体外灌流法を確立し、臓器保護メカニズムを明らかにすることである。主な解析対象を脂肪滴、小胞体、ミトコンドリアの相互作用に設定し、エネルギー代謝とCa2+、水の動態を精査することを目指している。目的達成のために研究協力者 (大学院生) に臓器冷保存、肝低温酸素化灌流、移植後の再灌流を模した単離肝灌流等のモデルの技術を指導し、習得させた。所属研究室で常時行っている他の臓器保存研究と連動して、手術指導やデータの評価をリモートで実施できるシステムを構築した。SHRSP5-Dmcr rat, 雄, 4-8週令に高脂肪・コレステロール(HFC)食を給餌した。5～14日の給餌によって繊維化を伴わない単純性脂肪肝を呈し、8-12日の給餌が本検討に適した大滴性脂肪肝となった。また、市販の核、細胞質、ミトコンドリアの分画法を検討し、全画分で十分なタンパク質量を得ることができるようになった。また、肝組織のproteomics解析とメタボローム解析のための試料を同時に得るための条件検討を行った。具体的には、トリクロロ酢酸 (TCA) により沈殿させたタンパク質を洗浄、精製、消化してLC-MS/MS用の試料とした。上清の水溶性代謝物層はジエチルエーテルによるTCA除去を繰り返し、pHが安定した試料を作成することに成功した。

Fatty liver disease is not enough to solve the problem of treatment, large drop fatty liver disease is not good. In recent years, mechanical perfusion (MP) has been shown to reduce the damage caused by large drop (30-60%) fatty liver and deficient blood reperfusion. The effect of degreasing promoter, optimal perfusion temperature, perfusion fluid, temperature and temperature of degreasing promoter is not suitable. The purpose of this study was to establish a new method for reducing the injury of cold preservation and reperfusion of fatty liver, and to clarify the mechanism of organ protection. The main analysis targets are fat droplets, small cells, and the interaction between them. The main analysis targets include the interaction between fat droplets and small cells, the interaction between fat droplets and small cells, the interaction between fat droplets and small cells, and the interaction between fat droplets and small cells. Objective To achieve this goal, the research collaborators (college students) instructed and learned the techniques of cold preservation, liver hypothermia and reperfusion, and liver reperfusion after transplantation. The laboratory is often used to conduct research on the preservation of other instruments, surgical guidance, and evaluation of equipment. SHRSP5-Dmcr rat, male, 4-8 weeks old, high fat, HFC diet 5 - 14 days of feeding, maintenance, and development of pure fatty liver, 8-12 days of feeding, and development of large fatty liver. The nuclear, cytoplasmic, and cellular components of the system are analyzed and analyzed in detail. The proteomics analysis of liver tissue and the analysis of samples were carried out simultaneously. Specific TCA is used to purify, purify, and digest samples for LC-MS/MS. The supernatant water soluble metabolite layer was successfully prepared by TCA removal and pH stabilization.