Elucidation of molecular mechanism about anti-tumor immune evasion by beta-catenin in hepatocellular carcinoma and its therapeutic application

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2022年度の研究では、当研究室で樹立したマウスHCC細胞株(3H3, HrasQ61L)にCas9を用いてPten-KOを行い(3H3-P細胞)、さらにCtnnb1 exon3-skipping (3H3-PC細胞)、およびCtnnb11-4A(constitutive active)を導入(3H3-PC細胞)しβ-catenin高発現細胞を作成した。これらをヌードマウスに皮下移植し、回収された腫瘍サンプルについて次世代シーケンスを用いた解析によりマウス・ヒトで共通するサイトカイン・ケモカイン変化を同定した。一方、もともとβ-catenin高発現 (exon3 skipping) のHepa1-6細胞株にexon2/4型ｍRNAの選択的ノックダウンを行ない(Hepa1-6-C細胞)で上記のサイトカイン・ケモカインの変化を確認中である。上記の3H3-P細胞、3H3-PC細胞およびHepa1-6細胞、Hepa1-6-C細胞を用いたin　vitroでの免疫応答系の再現に時間を要している部分はあるが、mRNA・タンパク発現・Flow cytometryなどを用いて樹状細胞・T細胞の遺伝子発現解析を継続中である。