Molecular mechanism of activation of myofibroblasts and cancer associated fibroblasts in fibrotic liver

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１．マウス肝癌モデルにおける癌関連線維芽細胞CAF誘導：I型コラーゲンの発現をGFPで標識したreporterマウス（Col-GFPマウス）に対して、diethylnitrosamin (DEN)を使用した肝発癌誘導下に、CCl4投与による肝細胞性障害、コリン欠乏メチオニン減量高脂肪食(CDAHFD)による非アルコール性脂肪肝炎（NASH）を誘発し、慢性肝障害に伴う肝線維化を背景とする肝癌のモデルを確立した。背景肝にはCol-GFPで標識される肝臓myofibroblastの増殖を確認し、さらに腫瘍内にも同様にCol-GFP陽性のCAFの浸潤が認められた。2. マウス肝臓のCAFとmyofibroblastのトランスクリプトーム解析：上述の肝線維化を背景とする肝癌を誘発したマウス肝臓組織から１細胞ごとの核を抽出し、single nucleotide RNA seqによって、 CAFと背景肝のmyofibroblastの遺伝子発現プロファイルの解析を進めている。また、同じくマウス組織切片を用いて、Visiumによる空間トランスクリプトーム解析を行い、CAFとmyofibroblastの局在における遺伝子発現と腫瘍との関連性を検証する予定としている。3.ヒト肝癌組織を用いた免疫染色と空間トランスクリプトーム解析：ヒトの肝癌手術標本の切片を用いて、これをαSMAやThy1などの線維芽細胞マーカーで染色し、背景非腫瘍部および腫瘍部の線維芽細胞浸潤を確認した。肝細胞癌では腫瘍被膜部位に、sirius red染色で標識される線維化部位に一致してαSMA陽性細胞の浸潤が認められた。マウス肝組織を用いたトランスクリプトーム解析と同様に、ヒトの肝癌組織切片を用いて空間トランスクリプトーム解析を行い、CAFとmyofibroblastの遺伝子発現マーカーの治療標的としての妥当性を検証する。